Diagnóstico de criptosporidiose em amostras fecais de bezerros por imunofluorescência direta e microscopia de contraste de fase

Abstract

O presente estudo teve como objetivo comparar as técnicas de imunofluorescência direta (IFD) e a microscopia de contraste de fase em solução de Sheather (MCF), para detecção de oocistos de Cryptosporidium spp. em amostras fecais de bezerros. A determinação dos limiares detecção da IFD e da MCF foi realizada utilizando cinco alíquotas de uma amostra fecal de bezerro, comprovadamente negativa para Cryptosporidium spp., adicionadas com diferentes quantidades de oocistos de Cryptosporidium parvum. Ao exame das 5 alíquotas, a IFD e a MCF apresentaram, respectivamente, limiares de detecção de 3,3x104 (duas alíquotas positivas) e 3,3x105 oocistos (1 alíquota positiva) por grama de fezes. Foram também realizadas a comparação entre a positividade obtida e uma análise semiquantitativa do número de oocistos observados por campo de microscopia, em ambos os métodos, em 300 amostras fecais de bezerros. Entre as 300 amostras, 19,7% (59/300) foram positivas pela IFD, com diferença estatisticamente significante (P=0,0098) quando comparada com a positividade obtida pela MCF, que foi de 11,7% (35/300). As amostras positivas foram submetidas à reação em cadeia da polimerase para amplificação de fragmentos da subunidade 18S do rRNA, com posterior sequenciamento dos fragmentos amplificados, o que permitiu a identificação de Cryptosporidium andersoni em 11,9% (7/59) e de C.parvum em 88,1% (52/59) das amostras. Os resultados observados comprovam que a IFD foi mais eficiente que a MCF para detecção de oocistos de Cryptosporidium spp. em amostras fecais de bezerros.

Cryptosporidium infections in birds - a review

“…The diagnostic methods using microscopy that are most used and least expensive involve screening for oocysts after centrifugal flotation in Sheather's solution, followed by phase contrast microscopy (Figure 3b) or bright-field microscopy (CARDOZO et al, 2008;TEIXEIRA et al, 2011a) and any of the many staining techniques for fecal samples, including negative malachite green staining (Figure 3c) (ELLIOT et al, 1999) and acid-fast staining (HENRIKSEN & POHLENZ, 1981;ORTOLANI, 2000;CARDOZO et al, 2008). In morphometric studies, morphological and morphometric alterations in oocysts should be considered when fecal smears are subjected to staining techniques (MEIRELES & FIGUEIREDO, 1992;CARDOZO et al, 2005).…”

Validation of a new technique to detect Cryptosporidium spp. oocysts in bovine feces

“…negative malachite green staining (Elliot et al, 1999), safranin methylene blue (Garcia, 2007(Garcia, , 2009 and trichrome (Garcia, 2007(Garcia, , 2009. Other techniques can also be used for this diagnostic purpose, such as phase contrast microscopy (Teixeira et al, 2011), direct fluorescent antibody test (CDC, 2015) and enzyme-linked immunosorbent assay (CDC, 2015).…”

OCCURENCE OF PROTOZOAN FROM THE GENUS Cryptosporidium spp. IN CATTLE RAISED IN PROPERTIES OF THE RURAL ZONE IN THE COUNTY OF BOM JESUS, PIAUI

“…were found in 100% of the analyzed calves, using the Ziehl-Neelsen modified method (Almeida et al, 2008). Teixeira et al (2011) also reported 100% of the animals parasitized by this protozoan in a study in the state of São Paulo.…”