Degeneration rate of goat primordial follicles maintained in TCM 199 or PBS at different temperatures and incubation times

Silva, José Roberto Viana; Brasil, Alline Ferreira; Santos, Regiane R.; Costa, Sónia; Rodrigues, Ana Paula Ribeiro; Ferreira, Marcos; Machado, Vanessa Porto; Figueiredo, José Ricardo de

doi:10.1590/s0103-84782003000500019

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“…A isquemia pode resultar em alterações na permeabilidade da membrana celular e estas modificações podem ocasionar o aumento de água intracelular e do volume celular, vacuolização citoplasmática e, consequentemente, degeneração (BARROS; HER-MOSILLA; CASTRO, 2001). Assim, visando à diminuição desses efeitos, a hipotermia causada por baixas temperaturas (4°C e 20°C) ocasiona uma redução no metabolismo celular, minimizando as necessidades metabólicas e aumentando a resistência de folículos à redução de nutrientes e oxigênio durante a preservação in vitro (SILVA et al, 2003). Deve ser ressaltado que o transporte de ovários com a presença da bursa, como realizado no presente trabalho, é um fator que pode promover a proteção dos oócitos conservando--se a sua temperatura resfriada.…”

Section: Discussionunclassified

Influência da temperatura de transporte de ovários na maturação in vitro de oócitos caninos coletados em diferentes estágios do ciclo estral

Pereira

Bersano

Lopes

2015

Braz. J. Vet. Res. Anim. Sci.

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ResumoFoi avaliada a influência do ciclo estral e temperatura de transporte de ovários na maturação in vitro de oócitos caninos. As cadelas foram categorizadas em dois grupos baseados no estágio do ciclo estral -anestro ou diestro. Um ovário por par coletado foi transportado em solução fisiológica 0,9% à 4°C enquanto o outro foi transportado a 37°C. Então, os ovários foram seccionados em PBS para a liberação dos complexos cumulus oócito (COCs). Um total de 345 COCs (n = 186 oócitos obtidos de cadelas em anestro e 159 em diestro) foi cultivado em TCM 199 suplementado com HEPES, piruvato de sódio, cisteína, hormônio folículo estimulante (FSH), gonadotrofina coriônica humana (hCG), estrógeno (E 2 ) e fator de crescimento epidermal (EGF). Após 72h de maturação, os COCs foram desnudados, fixados e corados para avaliação da maturação nuclear. O teste de Fisher foi utilizado para avaliar as diferenças entre os grupos. O nível de significância adotado foi de 0,05. Os oócitos obtidos de cadelas em diestro transportados a 4°C apresentaram maior frequência de oócitos no estágio de metáfase II (21,1%) que os mantidos na temperatura de 37°C (p < 0,01). De forma similar, houve maior frequência de oócitos nos estágios de metáfase II (11,2%) nos ovários obtidos de cadelas em anestro e transportados a 4°C que nos ovários mantidos a 37°C (p < 0,05). Concluiu-se que a temperatura de transporte influencia os resultados de viabilidade oocitária canina e a maturação in vitro, independentemente do estágio reprodutivo da fêmea. Palavras-chave:Maturação in vitro. Temperatura. Anestro. Diestro. Cadela. AbstractThis study evaluated the influence of estrous cycle stage and transport temperature of ovaries on in vitro maturation of canine oocytes. The bitches were categorized into two groups based on stage of estrus cycle: diestrus or anestrus. One ovary of each pair collected was transported in saline solution at 4°C while the other was transported at 37°C. Thus, ovarian tissue was sliced in PBS to release cumulus oocyte complexes (COCs). A total of 345 COCs (n = 186 oocytes from ovaries of bitches in anestrus and 159 in diestrus) were cultivated in TCM 199 supplemented with HEPES, sodium pyruvate, cysteine, follicle stimulating hormone (FSH), human chorionic gonadotropin (hCG), estrogen (E 2 ) and epidermal growth factor (EGF). After 72h of maturation, the COCs were denuded, fixed and stained to assess nuclear maturation. The Fisher test was applied to examine the differences between the groups. The significance level adopted was 0.05. The oocytes obtained from the ovaries from bitches in diestrus transported at 4°C shown increased frequency of oocytes in metaphase II stage than those maintained at 37°C (p < 0.01). Similarly, there was increased frequency of oocytes in metaphase II (11.1%) stage from the ovaries of bitches in anestrus and transported at 4°C, than those maintained at 37°C (p < 0.05). It was concluded that transport temperature influences the results of canine oocyte viability and in vitro maturation, regardless of reproduc...

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Section: Discussionunclassified

Influência da temperatura de transporte de ovários na maturação in vitro de oócitos caninos coletados em diferentes estágios do ciclo estral

Pereira

Bersano

Lopes

2015

Braz. J. Vet. Res. Anim. Sci.

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“…Portanto, a G6PDH, que está relacionada ao metabolismo da glicose, tem a capacidade de reduzir o ACB de azul para incolor, fazendo com que oócitos em fase inicial de crescimento permaneçam sem coloração (não viáveis), enquanto que os oócitos imaturos crescidos aptos para a maturação apresentem uma coloração azul em seu citoplasma (viáveis) (SHABANKAREH et al, 2014). Em oócitos imaturos antes da maturação, a redução da atividade da G6PDH evidencia que essa enzima tem sua atividade reduzida pelo fim do crescimento oocitário necessário durante o desenvolvimento folicular.…”

Section: Methodsunclassified

“…Além disso, a ausência de diferenças estatísticas na taxa de recuperação oocitária e na morfologia dos oócitos recuperados (Tabela 5) sugere que as características dos folículos permaneceram mesmo após 24 h de resfriamento na presença de meios apropriados (SANTOS et al, 2002;SILVA et al, 2003). Contudo, os meios complexos, suplementados ou não com SFB, que foram testados neste estudo, tiveram maior capacidade de manter a viabilidade das células do cumulus, mostrando que esse fator é de grande importância para a conservação de ovários resfriados por longos períodos de tempo.…”

Section: Grupounclassified

Influência Dos Meios De Estocagem Durante O Transporte De Ovários Bovinos a 4°c Sobre a Recuperação E Qualidade Oocitária

Deus

Silva

Santos

et al. 2018

Ars Vet

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O objetivo foi avaliar diferentes meios na presença e ausência de soro fetal bovino (SFB; 10%) durante o transporte por 24 h de ovários a 4°C sobre a recuperação e a qualidade oocitária bovina. Cinco experimentos foram realizados comparando: (E1) NaCl vs. NaCl+SFB vs. controle (não resfriado), (E2) PBS vs. PBS+SFB vs. controle, (E3) DMEM vs. DMEM+SFB vs. controle, (E4) DPBS vs. DPBS+SFB vs. controle e (E5) melhores resultados dos experimentos anteriores. Após a aspiração folicular, oócitos foram avaliados quanto à qualidade por critérios morfológicos e ensaio de azul cresil brilhante. Ainda, células dos cumulus de oócitos viáveis foram avaliadas quanto à viabilidade pelo azul de tripan. No E1, NaCl permitiu uma maior taxa de recuperação em relação ao NaCl+SFB (46,0% vs. 39,6%), enquanto que os demais parâmetros não foram alterados. Já no E2, o SFB em PBS influenciou positivamente a taxa de recuperação (41,2% vs. 32,8%) e a viabilidade celular (46,3% vs. 41,7%), quando comparado ao PBS. No E3, o SFB em DMEM teve uma influência negativa sobre a taxa de recuperação (39,9% vs. 40,7%) e avaliação morfológica (59,0% vs. 73,1%). Contudo, a adição de SFB ao DMEM se mostrou benéfica à viabilidade celular (42,0% vs. 34,5%). Em relação ao E4, a presença de SFB em DPBS influenciou positivamente a viabilidade celular (50,7% vs. 47,0%). Já no E5, comparando os melhores grupos [NaCl, PBS+SFB, DMEM, DPBS+SFB], a viabilidade celular mostrou uma maior porcentagem em DMEM (54,0%) e DPBS (54,5%), quando comparada a NaCl (48,3%) e PBS (50,1%). Em conclusão, a presença do SFB em meios com alta capacidade de tamponamento (PBS e DPBS) pode se mostrar benéfica. Contudo, DMEM e DPBS resultam num ambiente mais propício para o resfriamento de ovários bovinos.

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“…Os folículos, por sua vez, produzem 17-β-estradiol, que promove alterações no comportamento da fêmea para que ela permita a monta, e prepara o organismo para a ovulação. Mais de 99% dos folículos ovarianos sofre atresia folicular e apenas um pequeno número deles se torna competente e chega à ovulação (Guilbault et al, 1986;Silva, 2003). Portanto, a população total de folículos ovarianos é composta por uma grande reserva de folículos primordiais quiescentes e um pequeno número de folículos em crescimento (Cahill e Mauléon, 1981).…”

Section: Revisão De Literatura Oogênese E Foliculogêneseunclassified

Cultivo in vitro e em membrana corioalantoica e autotransplante heterotópico de tecido ovariano de gatas domésticas

Vilela¹

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Não se faz um doutorado sozinha.Por isso, este trabalho não é só meu. Ele é da Ellen, da Liu, da Letícia, da Raísa, da Thaís, da Carol, da Christiani.Ele é da Renata e da Silvia. É de toda a equipe da Empório dos Bichos. É do Olivier e da Dolores.Este trabalho também é da Cláudia, da Sabrina, da Nicole, da Pantera, da Bela, da Lua, da Fênix e da Daisy.Nada disso seria possível sem vocês. Por isto, esta tese também é de vocês.Serei eternamente grata por todo o auxílio, por toda a compreensão, pelo apoio, pelas lições, pelo aprendizado.Que tudo que vocês fizeram por mim nestes quatro anos retorne triplicado para suas vidas. AGRADECIMENTOSAgradeço primeiramente à Carol, minha orientadora, por todo apoio, auxílio, aprendizado e orientação essenciais durante esse período.À minha família, pelo apoio e pelos conselhos, em especial minha mãe, que além de ajudar com várias análises estatísticas, também me aconselhou nos momentos de dúvida e me ajudou mais do que ela pode imaginar; e ao meu pai, cujas lições e reflexões desde que me entendo por gente me ajudaram a chegar onde estou hoje, e pela revisão e crítica à escrita desta tese, que foram extremamente valiosas.Ao Lucas, meu Chou, que esteve presente mesmo quando estava longe, que me apoia, me ouve e me ajuda o tempo todo.Às estagiárias mais que essenciais: Raísa e Thaís, cuja ajuda e carinho no cuidado com as nossas gatinhas fez toda a diferença do mundo, principalmente para elas. À Ellen, que me ajudou na primeira fase do trabalho e no desenvolvimento da segunda fase, por ter feito as imunos e pela amizade que construímos ao longo do tempo. À profa. Aline Pic-Taylor, pelo auxílio com a incubação dos ovos, por me emprestar o laboratório de vez em quando e por todas as sugestões super bem aproveitadas no meu doutorado. Agradeço enormemente à Liudimila (Liu), cujo auxílio foi essencial para a última fase do projeto. Mil vezes, obrigada pela disponibilidade e pela amizade. Foi excelente trabalhar com você! À Christiani e a todo o laboratório de ginecologia da UCL em Bruxelas, pelo auxílio, pelo apoio, pela amizade e pela experiência vivenciada no meu doutorado sanduíche. Agradeço especialmente ao Olivier e à Dolores, técnicos do laboratório, cujo auxílio foi essencial. Agradeço também à Marie-Madeleine Dolmans por ter me recebido em seu laboratório. Aos amigos de longe e de perto, que fazem sempre toda a diferença na minha vida. Aos meus irmãos do Coven Labirinto das Sombras, a Brandon, Aldrich, John, Agathos e Naelyan, que se fizeram presentes mesmo quando eu estava do outro lado do oceano e espantaram muito da minha solidão. Às novas amizades feitas, especialmente Fernanda, Marcelo, Costanza, Renan, Guillaume, Mercedes e Michelle, que tornaram os dias nublados da Bélgica um pouco mais agradáveis. Agradeço às gatinhas que foram resgatadas do CCZ para participar deste experimento. Espero ter mudado um pouquinho do mundo de vocês e espero que vocês estejam muito felizes em seus lares! A toda a equipe da clínica Empório dos Bichos, especialmente às veterinárias Renata e Si...

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Degeneration rate of goat primordial follicles maintained in TCM 199 or PBS at different temperatures and incubation times

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Influência da temperatura de transporte de ovários na maturação in vitro de oócitos caninos coletados em diferentes estágios do ciclo estral

Influência da temperatura de transporte de ovários na maturação in vitro de oócitos caninos coletados em diferentes estágios do ciclo estral

Influência Dos Meios De Estocagem Durante O Transporte De Ovários Bovinos a 4°c Sobre a Recuperação E Qualidade Oocitária

Cultivo in vitro e em membrana corioalantoica e autotransplante heterotópico de tecido ovariano de gatas domésticas

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