Este estudo objetivou verificar a adesão da equipe multiprofissional de um Hospital ao norte do Estado de Minas Gerais quanto à higienização das mãos e em quais situações é utilizada. Estudo quantitativo, descritivo e observacional. Foi utilizado um roteiro de observação previamente validado e testado pela Agência Nacional de Vigilância Sanitária para o registro das observações. Foram observadas 85 oportunidades entre 15 profissionais de saúde, tendo 44% de adesão. Destaca-se a categoria médica pela baixa adesão, sendo que das 36 oportunidades de higienização das mãos, somente 4 oportunidades foram realizadas (11,2%). Quanto à categoria de enfermagem, os técnicos obtiveram 35, com 62,8% de adesão que equivale a 22 oportunidades realizadas; já os enfermeiros, das 14 oportunidades que tiveram, 12 foram concretizadas equivalendo a 85,8% de adesão à higienização das mãos. A higienização das mãos em algumas indicações não está incorporada à prática diária desses profissionais e, por isso, espera-se que as ações educativas possibilitem a reflexão da atuação de cada sujeito, propiciando a aprendizagem e modificando as práticas instituídas.Palavras-chave: lavagem de mãos, controle de infecções, pessoal de saúde.