Comparison between polyethylene glycol- and polyethylenimine-mediated transformation of Aspergillus nidulans

Kuwano, Tetsuya; Shirataki, Chikako; Itoh, Yasuo

doi:10.1007/s00294-008-0204-z

Cited by 18 publications

(8 citation statements)

References 49 publications

Supporting

Mentioning

Contrasting

Unclassified

Order By: Relevance

“…The mycelia for transformation were collected by filtration, washed with 0.6 M KCl and suspended in 0.6 M KCl buffered with 10 mM potassium phosphate pH 6.5 and containing the following lytic enzymes: 15-20 mg/ml of Glucanex ® (Novozymes), 2 mg/ml of Driselase ® (Sigma-Aldrich) and 1 mg/ml of snail acetone powder (Sigma-Aldrich). The protoplasts were prepared and transformed using the PEG method (Kuwano et al, 2008). To increase transformation efficiency, 5 μg of the HELp helper plasmid (Gems & Clutterbuck, 1993) was added.…”

Section: Methodsmentioning

confidence: 99%

Molecular characterization of central cytoplasmic loop in Aspergillus nidulans AstA transporter

et al. 2018

View full text Add to dashboard Cite

AstA (alternative sulfate transporter) belongs to a large, but poorly characterized, Dal5 family of allantoate permeases of the Major Facilitator Superfamily. The astA gene has been cloned from an IAM 2006 Japanese strain of Aspergillus nidulans by complementation of a sulfate permease-deficient mutant. In this study we show that conserved lysine residues in Central Cytoplasmic Loop (CCL) of the AstA protein may participate in anion selectivity, and control kinetic properties of the AstA transporter. A three-dimensional model containing four clustered lysine residues was created, showing a novel substrate-interacting structure in Major Facilitator Superfamily transporters. The assimilation constant (Kτ) of wild type AstA protein is 85 μM, while Vmax/mg of DW of AstA is twice that of the main sulfate transporter SB per mg of dry weight (DW) of mycelium (1.53 vs. 0.85 nmol/min, respectively). Amino acid substitutions in CCL did not abolish sulfate uptake, but affected its kinetic parameters. Mutants affected in the lysine residues forming the postulated sulfate-interacting pocket in AstA were able to grow and uptake sulfate, indicating that CCL is not crucial for sulfate transportation. However, these mutants exhibited altered values of Kτ and Vmax, suggesting that CCL is involved in control of the transporter activity.

show abstract

Section: Methodsmentioning

confidence: 99%

Molecular characterization of central cytoplasmic loop in Aspergillus nidulans AstA transporter

et al. 2018

View full text Add to dashboard Cite

show abstract

“…The PCR cycles and temperature were as follows: 94°C for 3 min; 35 cycles (94°C,45 s; 60°C,45 s; 72°C, 90 s); and a final extension at 72°C for 5 min. The products from the second round of PCR were transformed into the WT HBCg01 using polyethylene glycol/CaCl 2 , as described previously (Kuwano, Shirataki, & Itoh, ). The putative transformants were selected for resistance to hygromycin B before the DNA was extracted.…”

Section: Methodsmentioning

confidence: 99%

The Colletotrichum gloeosporioides perilipin homologue CAP 20 regulates functional appressorial formation and fungal virulence

Lin

Liu

Shi

et al. 2017

Journal of Phytopathology

View full text Add to dashboard Cite

Previous studies of the CAP20 gene in Colletotrichum gloeosporioides show that the CAP20 gene may affect virulence in avocados and tomatoes. In this study, we characterized the function of CAP20 from C. gloeosporioides, the causal agent of Colletotrichum leaf fall disease of Hevea brasilience. CAP20 encodes a perilipin homologue protein.Further investigations showed that the Cap20-GFP fusion protein localized in lipid droplets in hypha and conidia. A C. gloeosporioides mutant, lacking CAP20, had thinner spores and smaller appressoria, and its turgor pressure generation was dramatically reduced and pore size was enlarged. Furthermore, we tested the pathogenicity of conidia from the wild type, gene-deleted mutant and complemented transformant C.gloeosporioides on the leaves of rubber trees in sterile water and 0.19 M PEG2000.Conidia from the wild type and complemented transformant C. gloeosporioides in 0.19 M PEG2000 caused necrotic lesions and did not produce any lesion with the CAP20 null mutant. But all of them had developed normal disease lesions when they were inoculated in water. These results suggest that CAP20 is a perilipin homologue protein and is involved in functional appressoria development in C. gloeosporioides. CAP20 gene only affects fungal virulence to some extent by reducing the penetration of the immature appressoria into host cuticle in C. gloeosporioides.

show abstract

“…Было обнаружено, что ПЭГ вызывает адгезию протопластов, что, как считается, облегчает поступление ДНК в клетки грибов. Однако было показано, что ПЭГ вряд ли индуцирует взаимодействие между ДНК и поверхностью клетки, и слияние протопластов не является прямой причиной поглощения ДНК; следовательно, роль ПЭГ в поглощении ДНК остается в значительной степени неизвестной (Kuwano et al, 2008). После обработки ПЭГ протопласты промывают осмотическим буфером, содержащим сорбитол, и переносят в регенерационную среду для восстановления клеточной стенки перед помещением на селективную среду.…”

Section: трансформация протопластов с помощью полиэтиленгликоля (пэг)unclassified

Transformation of Entomopathogenic Fungi: A Methodological Review

Timofeev¹,

Zhuravlev²,

Dolgikh³

2019

PPN

View full text Add to dashboard Cite

Энтомопатогенные грибы широко используются в качестве безопасной для окружающей среды альтернативы химическим пестицидам против сельскохозяйственных вредителей и переносчиков болезней человека. Одним из перспективных способов увеличения эффективности биопрепаратов на основе мицелиальных грибов является их генная модификация. С помощью генетической трансформации можно существенно повысить вирулентность используемых штаммов, а также повысить их устойчивость к абиотическим факторам среды. В данном обзоре представлены современные методики трансформации энтомопатогенных анаморфных аскомицетов: полиэтиленгликоль-опосредованная трансформация протопластов, трансформация с помощью агробактерий, электропорация пророщенных конидий и химическая трансформация бластоспор. Сравнительный анализ данных методик показал, что агробактериальная трансформация является наиболее универсальным методом, широко описанным для различных видов мицелиальных патогенов насекомых, таких как представители родов Beauveria, Metarhizium и Lecanicillium. В то же время простой и наименее затратный по времени метод химической трансформация бластоспор на сегодняшний день применялся только для вида B. bassiana. Также в обзоре описаны способы рекомбинации встраиваемых последовательностей в геном грибов и генетические маркеры, применение которых возможно для негативной и позитивной селекции модифицированных организмов.Ключевые слова: энтомопатогенные грибы, трансформация, защита растений, протопласты, агробактерии, электропорация Поступил а в редакцию: 03.02.2019 Принят а к печати: 30.05.2019Работа выполнена в рамках госзадания № 0483-2019-0001.

show abstract

Comparison between polyethylene glycol- and polyethylenimine-mediated transformation of Aspergillus nidulans

Cited by 18 publications

References 49 publications

Molecular characterization of central cytoplasmic loop in Aspergillus nidulans AstA transporter

Molecular characterization of central cytoplasmic loop in Aspergillus nidulans AstA transporter

The Colletotrichum gloeosporioides perilipin homologue CAP 20 regulates functional appressorial formation and fungal virulence

Transformation of Entomopathogenic Fungi: A Methodological Review

Contact Info

Product

Resources

About