2011
DOI: 10.1590/s0102-09352011000300002 View full text |Buy / Rent full text
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Abstract: Comparative validation using quantitative real-time PCR (qPCR) and conventional PCR of bovine semen centrifuged in continuous density gradient [Validação comparativa utilizando PCR quantitativo em tempo real (qPCR) ABSTRACTThe objective of the present study was to determine the sperm enrichment with X-bearing spermatozoa, after one centrifugation in a Percoll or OptiPrep continuous density gradient, using quantitative real-time polymerase chain reaction (qPCR) of sperm DNA and resultant in vitro-produced bo… Show more

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“…A taxa de espermatozoides recuperados no sedimento, após a centrifugação, foi de 22,12% e 20,05% para o Percoll e OptiPrep, respectivamente, o que foi semelhante aos resultados obtidos por Hossepian de Lima et al (9) , utilizando sêmen bovino congelado e centrifugado em gradiente descontínuo de Percoll. Com a utilização de sêmen bovino congelado e aplicando também gradientes contínuos, Resende et al (8) obtiveram taxas de recuperação média de 5,7% e 19,4%, para Percoll e OptiPrep, respectivamente, sendo que somente o grupo Percoll obteve sucesso na separação de espermatozoides X. Mousset-Simeon et al (15) demonstraram que o OptiPrep foi menos efetivo do que o Percoll em separar espermatozoides humanos com motilidade e sem alteração na morfologia. Contrariamente, os resultados obtidos aqui indicaram que o Percoll e o OptiPrep foram semelhantes quanto à motilidade pós-centrifugação, o que está de acordo com os resultados encontrados em trabalho com humanos (16) e bovinos (5) .…”
Section: Resultsunclassified
“…Estes resultados ficaram abaixo dos obtidos em outros trabalhos que utilizaram sêmen criopreservado e que apreentaram desvio para o sexo feminino em torno de 62%, quando se utilizou gradiente contínuo (8) , e de 55,7% (19) , 62% (6) e 75% (9) , quando utilizaram-se gradientes descontínuos. Observa-se que, mesmo para bovinos, a técnica de centrifugação precisa ser aprimorada, no intuito de melhorar a sua repetitividade.…”
Section: Resultsunclassified
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“…A similar value (25%) was obtained by Hossepian Lima et al (2000) in bovine sperm, sexed in discontinuous Percoll® density gradients. Nevertheless, in most studies, a lower recovery rate was reported, ranging from 4.12 to 5.7% (Oliveira et al, 2011;Resende et al, 2011).…”
Section: Discussionmentioning
“…Percoll® density gradients were performed as described by Oliveira et al (2011) and Resende et al (2011) for sex sorting of bovine semen, with modifications. An isotonic solution of 90% Percoll® was prepared diluting commercial Percoll® (9:1, v:v) (Percoll® TM; GE Healthcare Bio-Sciences AB, Rapsgatan, Uppsala, Sweden) in 10x concentrated DMEM solution (135g DMEM, 0.3% BSA, 10mg/L antibiotic, 6mM HEPES, 1L Milli-Q q.s.ad water).…”
Section: Methodsmentioning