Características de nuevos cultivos celulares derivados de tejidos embrionarios de Aedes aegypti (Diptera: Culicidae).

Abstract

Introducción. Los cultivos celulares de insectos son una metodología útil en estudios biomédicos y tecnológicos. Objetivo. El propósito principal del presente trabajo fue obtener y caracterizar cultivos celulares derivados de tejidos embrionarios de Aedes aegypti. Materiales y métodos. Se emplearon huevos embrionados para los explantes de tejidos en los medios de cultivos MM/VP12 y L-15/Grace, con suplemento de 20% de suero fetal bovino y una mezcla al 1% de antibiótico y antimicótico, con un rango de pH entre 6,8 y 7,0. Los cultivos se incubaron a una temperatura de 28 o C sin atmósfera de CO 2 . Resultados. El crecimiento celular se obtuvo en el medio L-15/Grace, 3 semanas después de haber sido sembrados los tejidos embrionarios; sin embargo, se necesitaron 6 meses para la formación de la monocapa confluente. Desde agosto de 2003 hasta junio de 2004, se habían realizado 28 subcultivos. Las células se caracterizaron morfológicamente; predominaron las formas epitelioides en subcultivos de pases altos. También se reconocieron las particularidades morfométricas del cariotipo y, además, se determinaron los perfiles isoenzimáticos y moleculares de los cultivos celulares, los cuales se compararon con muestras de adultos de la especie tomadas de la misma colonia y con líneas celulares derivadas de otros insectos. Discusión. Estas células representan, potencialmente, un importante sistema in vitro en investigaciones básicas y aplicadas. Palabras clave: Aedes aegypti, cultivos celulares, vesículas, cariotipos, isoenzimas, RAPD-PCR.Characteristics of new cell cultures derived from embryonic tissues of Aedes aegypti (Diptera: Culicidae) Introduction. Cell cultures from insects are a useful methodology in technological and biomedical studies.Objective. The present work was aimed at obtaining and characterizing cell cultures derived from Aedes aegypti embryonic tissues. Materials and methods. Embryonated eggs were used for embryonic tissue explants in L-15/ Grace and MM/VP12 culture media, supplemented with 20% fetal bovine serum and a mixture of 1% antimycotic and antibiotics, at a pH ranging from 6.8 to 7.0. The incubation temperature was 28 o C; a CO 2 atmosphere was not required. Results. Cell growth was obtained in L-15/Grace medium three weeks after embryonic tissues explants. Six months were required for achieving a confluent monolayer. Twenty-eight serial cell subcultures were carried out from August 2003 to June 2004. Cell morphology was characterized as epithelial in the later subcultures. Karyotype morphometry as well as molecular and isozymatic profiles were established. The cultures were compared with adult samples from the species taken from the same colony and with cell lines derived from other insects.

Establishing and characterising a new cell line from Calliphora vicina (diptera: calliphoridae) fly embryonic tissues

“…Molecular typing methods are very useful for discriminating between species and members of different species. C. vicina embryo cell culture molecular pattern based on RAPD-PCR markers revealed similarity coefficients that correlated very well with those reported in dipteran species such as L. sericata ( Acuña Morera et al., 2011 ), S. magellanica ( Cruz and Bello 2012 ), Aedes aegypti ( Ardila et al., 2005 ), coleopteran species such as Leptinotarsa decemlimeata ( Long et al., 2002 ) and T. castaneum ( Mahmoud and Kamel 2019 ) and in Lepidoptera such as S. exigua ( Chaeychomsri et al., 2016 ). The similarity coefficient confirmed evaluated cell line identity and shared relationship with different samples from the same insect species in each of the aforementioned studies.…”

Morfología y citoquímica de cultivos celulares de Aedes aegypti (Diptera: Culicidae) y susceptibilidad a Leishmania panamensis (Kinetoplastida: Trypanosomatidae)

“…Sin embargo, predominaron las formas de apariencia epitelioides, como lo registró Ardila et al (2005), diferente a lo observado en las líneas celulares Mos. 20 y 29, derivadas de tejidos larvarios de A. aegypti que presentaron una morfología en su mayoría fibroblastoide (varma y Pudney 1969, Ardila et al 2005).…”

“…También se realizó un estudio de susceptibilidad a la infección con L. chagasi y L. braziliensis en una línea celular de A. aegypti (Ardila et al 2005), establecida en Colombia a partir de tejidos embrionarios del mosquito. Los registros de esta investigación mostraron relativamente altos porcentajes de infección con ambas especies de parásitos, siendo mayor los resultados de infección con la especie L. braziliensis (29.8%), obtenidos durante el día 6 post-infección; razón por la cual los autores concluyeron que estos cultivos celulares son un modelo alternativo in vitro para el estudio de los parásitos mencionados (Muñoz et al 2005).…”

Líneas celulares de dípteros: características, aplicaciones y aportes desde Colombia

“…En contraste, otra línea celular establecida con larvas neonatas de la misma especie en 1984, presentó solamente células diploides (Tabla 1) [24]. Otro caso de cambio genético en líneas celulares de la misma especie se produjo en Aedes aegypti, por ejemplo, para esta especie se estableció una línea a partir de homogenizados de larvas a punto de convertirse en pupas, con medio Grace e incubadas a 30 • C, donde se observó que la mayoría de las células eran poliploides y no se encontraron células diploides, además, la mayoría presentó complemento cromosómico de 16 n, con una máximo de 32 n [12]; contrario a este evento, en otra línea celular establecida de huevos embrionados de esta misma especie y mantenida con Grace y L-15 (1:1), se observó en el subcultivo 60 que la población celular presentó en un 19 % aneuploidías, 16 % de triploidias y tetraploidias, siendo las más representativas las trisomías y monosomías [25].…”

“…Los dípteros vectores de enfermedades juegan un papel importante en el tratamiento de las enfermedades que transmiten, por esto se desarrollan líneas celulares de insectos vectores con el fin de conocer cómo se replica el virus; un ejemplo de esto, es la línea celular establecida a partir de tejido embrionario de Ae aegypti, en el 2005 la cual presentó mayoritariamente células epitelioides [25]. Esta línea celular se empleó en el 2007 para realizar ensayos de susceptibilidad a infecciones por arbovirus como el DENV (MOI 1 y 5) y el virus de fiebre amarilla (MOI 0,02); en los resultados obtenidos no se observó inmunoreactividad, ni antígeno, ni RNA viral por RT-PCR a partir de células infectadas para ninguno de los MOIs estudiados.…”