El trabajo se realizó durante 2008 en Saltillo, Coahuila con el objetivo de aislar actinomicetos en diferentes medios de cultivo y evaluar su efecto antagonista in vitro contra hongos fitopatógenos de importancia económica. Para el aislamiento de los actinomicetos se realizaron muestreos de rizósfera de plantas, suelo, larvas y adultos de hormiga; las muestras se trataron con agua fenolizada y se sembraron por difusión enmediosdecultivoartificial:AgarDextrosaPapa(PDA), Agar Caseína Almidón (ACA), Agar de Actinomicetos (AA) y Agar Czapek Dox (ACD). Los aislamientos obtenidos se evaluaron preliminarmente por confrontación y observación. Se obtuvieron 70 aislamientos de actinomicetos en su mayoría de suelo; 25 presentaron efectos antagonistas, cuatro deellosAPA2,AASH48,AAH53yAPC70seseleccionaron por su actividad inhibitoria y permanencia a través del tiempo. En los bioensayos de antibiosis in vitro contra hongos fitopatógenos como Alternaria sp., Rhizoctonia sp., Fusariumsp.yColletotrichumsp.enlosmediosPDAyACD, los efectos antagonistas (% -de inhibición) fueron diferentes estadísticamente (p= 0.05). Los mejores resultados de inhibición se obtuvieron con Streptomyces spp., APC70 contra Alternaria (57.6%); mientras que Streptomyces spp., AAH53 lo fue para Rhizoctonia, Fusarium y Colletotrichum en 53.08%, 49.36% y 61.57%, respectivamente. Los actinomicetos saprofitos mostraron potencial antagónico y actividad inhibitoria contra hongos fitopatógenos.