A novel siRNA validation system for functional screening of effective RNAi targets in mammalian cells and development of a derivative lentivirus delivery system

Huang, Gang; Gao, Qiangguo; Zhao, Yongliang; Dong, Zongming; Li, Tengfei; Guan, Xinyin; Jiang, Jianxin

doi:10.1016/j.gene.2014.12.063

Cited by 4 publications

(3 citation statements)

References 30 publications

Supporting

Mentioning

Contrasting

Unclassified

Order By: Relevance

“…As usual, the dual-luciferase reporter toolkits have been articially modied and transfected into cells of interest for the rapid assessment of gene delivery, gene expression, gene silencing and gene cleavage. [46][47][48][49] However, this dual-luciferase reporter-based gene assay was rarely used to directly determine the off-target activity. In this study, we have demonstrated this tool's capacity of quantitative evaluation about the offtarget activity of Cas9 without considering chromatin structures or cell cycles.…”

Section: Discussionmentioning

confidence: 99%

Target DNA mutagenesis-based fluorescence assessment of off-target activity of the CRISPR-Cas9 system

et al. 2019

View full text Add to dashboard Cite

show abstract

Section: Discussionmentioning

confidence: 99%

Target DNA mutagenesis-based fluorescence assessment of off-target activity of the CRISPR-Cas9 system

et al. 2019

View full text Add to dashboard Cite

show abstract

“…Методами клонування будьякі фрагменти ДНК (або дволанцюгові РНК), отримані за допомогою рестриктаз, можна вбудувати в плазміду або ДНК бактеріофага -вектор для молекулярного клонування, а потім розмножити ці генетичні елементи в клітинах бактерій або дріжджів, збільшуючи їхню кількість у мільйони разів. Як вектор для клонування часто використовують бактеріальні плазміди [18]. На відміну від вірусних векторних систем, що мають вищий рівень експресії генетичної інформації, векторні системи на основі плазмід є більш доцільними для використання in vivo, оскільки вони не є токсичними й не мають онтогенетичного потенціалу на відміну від попередніх.…”

Section: фармакогеноміка -сучасний напрям пошуку ліківunclassified

Новітні Підходи До Фармакотерапії Судинної Дисфункції При Артеріальній Гіпертонії

Новохацька¹

2021

Фармакологія та лікарська токсикологія

View full text Add to dashboard Cite

Артеріальна гіпертонія все ще залишається хворобою, що продовжує погіршувати якість життя населення в усьому світі та збільшує кількість смертельних випадків. Сьогодні існує велика кількість препаратів для лікування гіпертензивних станів, проте всі вони не мають 100 % ефективності, оскільки існує досить велика кількість мішеней, задіяних у виникненні патологій. Учені все ще залишаються в активному пошуку як нових мішеней і ліків, так і методів доставки їх точно до цілі.Судинні дисфункції призводять до виникнення надзвичайно серйозних хвороб, таких як інфаркт чи інсульт, а також до інших порушень в організмі, що суттєво знижують якість життя. Вивчення даного питання є надзвичайно важливим для попередження серцево-судинних захворювань, зменшення рівня івалідизації населення та подовження тривалості життя. Головними перевагами фармакогеноміки є: створення більш ефективних і менш шкідливих специфічних препаратів на основі протеїнів, ензимів і молекул РНК, асоційованих з генами та хворобами; збільшення ефективності лікування; дозування відповідно до віку та ваги, індивідуального набору генів; зменшення ймовірності виникнення/розвитку генетичних хвороб; створення вакцин на основі ДНК або РНК, що активують імунну систему та не здатні спричинити інфікування організму, а також є недорогими, стабільними.Метод РНК-інтерференції є яскравим прикладом використання природних процесів як інструменту для дослідження та терапії. Встановлено, що застосування методу РНК-інтерференції для пригнічення експресії генів викликає тривалий і стабільний інтерференційний ефект, що проявляється в суттєвому зменшенні рівня експресії генів. Сьогодні фармакогеноміка знаходиться на стадії активного розвитку, що в майбутньому дасть змогу на новому рівні забезпечувати терапію хвороб різного генезу. Останнім часом велику увагу дослідників привертає вивчення механізмів регуляції судинного тонусу за участю шляхів, які прямо не пов’язані зі змінами концентрації іонів кальцію та які відіграють досить вагому роль у формуванні судинного тонусу. Артеріальна гіпертонія має велику кількість мішеней для терапевтичного впливу, тому надзвичайно важливим є застосування надточних ліків. Результати чисельних досліджень свідчать про те, що роль протеїнкінази С (ПКС) є однією з ключових у регуляції міогенного тонусу стінки кровоносних судин як за нормальних фізіологічних умов, так і, особливо, за умов розвитку гіпертензивних станів різного генезу. Доказом цього є те, що пригнічення експресії гена δ-ізоформи ПКС призводить до суттєвого зниження артеріального тиску в щурів, яке триває протягом тижня. Дотепер серед фармакологічних засобів лікування артеріальної гіпертонії не існує препаратів, дія яких спрямована на пригнічення ПКС у судинній стінці. Дослідження в цьому напрямі можуть призвести до створення нових класів фармакологічних засобів. І саме застосування фармакогеноміки у вигляді РНК-інтерференції за допомогою плазмідних векторів може стати тим інструментом, що шукають упродовж багатьох років дослідники в усьому світі.

show abstract

“…One major obstacle to developing RNAi-based therapeutics, however, is to determine the effective siRNA target sites of a gene of interest (GOI) and deliver it efficiently to the target cells or tissues . Although there are numerous procedural algorithms − and fluorescence reporter systems − to assist in the screening of potential siRNA sequences, the reporters for validating the optimal siRNA target sites are basically negative-readout systems and suffer from a low signal-to-background ratio. In addition, a wide range of siRNA delivery strategies has been explored to deliver siRNA molecules, including hydrodynamic injection, local administration, and various carriers such as lipids, polymers, and atelocollagen. , Despite the encouraging results of these approaches, dynamically monitoring the efficient delivery of siRNA to tissues of interest still remains a challenge.…”

Section: Introductionmentioning

confidence: 99%

In Vivo Visualization of RNAi Efficiency Using a Pumilio/FBF Protein-Based Reporter

Shi

Jiang

et al. 2022

Anal. Chem.

View full text Add to dashboard Cite

As a strategy that induces gene silencing by the delivery of small interfering RNA (siRNA) targeting a specific gene locus into cells or tissues, RNA interference (RNAi) technology holds the potential to be a powerful tool in a range of intractable disorder therapeutics. However, reliable noninvasive probes for visualizing the siRNA delivery and silencing efficiency have become a major obstacle in siRNA-based treatment. Here, we describe the development of an RNA-binding protein Pumilio/FBF (PUF)-based reporter probe for the monitoring of siRNA delivery efficiency and functional screening of effective siRNA target sites in vivo. This reporter consisted of a Firefly luciferase (Fluc) gene whose expression is regulated by the unique interaction architecture of the PUF protein with its Nanos response element (NRE) target RNA. We showed that a robust and rapid increase in the luminescence signal was detected by the successful delivery of siRNA against the enhanced green fluorescent protein (EGFP) or p53 genes into mammalian cells or the livers of mice. The delivery efficiencies of various commercial transfection vehicles were quantitatively evaluated with this reporter. In addition, we also employed in vivo bioluminescence imaging to screen and identify the most potent siRNA targeting p53. Our study indicates that the positive-readout reporter represents a promising indicator for siRNA optimization and visualization, advancing the development of siRNA therapeutic products.

show abstract

A novel siRNA validation system for functional screening of effective RNAi targets in mammalian cells and development of a derivative lentivirus delivery system

Cited by 4 publications

References 30 publications

Target DNA mutagenesis-based fluorescence assessment of off-target activity of the CRISPR-Cas9 system

Target DNA mutagenesis-based fluorescence assessment of off-target activity of the CRISPR-Cas9 system

Новітні Підходи До Фармакотерапії Судинної Дисфункції При Артеріальній Гіпертонії

In Vivo Visualization of RNAi Efficiency Using a Pumilio/FBF Protein-Based Reporter

Contact Info

Product

Resources

About