Imuno-histoquímica para identificação de células neoplásicas no infiltrado ativo de melanomas finos

Abstract

unitermos key words resumo Melanomas finos freqüentemente apresentam infiltrado linfocitário ativo. Melonócitos pigmentados e melanófagos dispersos no infiltrado linfocitário ativo são difíceis de se distinguir nas colorações de rotina, em lâminas coradas pela hematoxilina eosina (HE). A presença de melanócitos na derme papilar caracteriza a lesão como Clark II exigindo medida de Breslow, o que justifica a importância de vencer essas limitações técnicas. Mesmo usando técnica de imuno-histoquímica com Melan-A e diamino benzidina (DAB) como cromógenos, essa distinção é ainda difícil. O pigmento marrom formado pelo cromógeno DAB não pode ser facilmente diferenciado dos grânulos marrons do pigmento de melanina. Nós introduzimos uma simples modificação na técnica, substituindo a contracoloração de hematoxilina pelo Giemsa. Com essa modificação, o pigmento de melanina foi corado em azul-esverdeado, contrastando com a coloração positiva pelo Melan-A dos melanócitos, que permaneceu marrom. Macrófagos negativos para Melan-A continham apenas grânulos grosseiros azul-esverdeados no citoplasma. Assim, fomos capazes de identificar com precisão células Melan-A positivas na derme papilar, determinando microinvasão (Clark II) em 31 (75,5%) dos 40 casos de melanomas in situ (Clark I) associados com infiltrado linfocitário ativo. A técnica apresentada permite, portanto, diferenciar macrófagos e melanócitos dispersos no infiltrado linfocitário associado a melanomas finos, permitindo detectar invasão inicial, evitando interpretação errônea do nível de Clark e da medida de Breslow. Melanomas finos Melanoma in situ Melan-A Imuno-histoquímica! abstractThin melanomas are frequently associated with brisk lymphocytic infiltrate. Pigmented melanocytes are difficult to distinguish from melanophages, which are usually seen interspersed among lymphocytes on routine hematoxylin and eosin (HE) stained slides. As the presence of melanocytes in the papillary dermis characterizes the lesion as Clark II requiring the Breslow index, it is important to identify these cells properly and overcome such technical limitations. Even using immunohistochemistry staining for Melan-A and DAB as chromogens, this distinction is still difficult because the brown pigment formed by the chromogen DBA can not be easily differentiated from the brown melanin granules. We have introduced a simple modification on the technique, by replacing hematoxylin with Giemsa as counterstain. In this regard, the melanin pigment was decorated in green-blue while the Melan-A positive melanocytes were colored brown. Negatively stained melanophages contain only course green-blue granules of melanin in their cytoplasm. Thus, we were able to identify Melan-A positive cells in the papillary dermis accurately, determining microinvasion (Clark II) in 31 (77,5%) out of 40 in situ (Clark I) melanomas associated with brisk infiltrate. This technique is useful to distinguish melanophages and melanocytes interspersed among the lymphocytic infiltrate associated to thin melanomas, allowing detectio...

nbsp; language=pt]Melanoma tipo animal: relato de dois casos

“…A utilização de substâncias descolorantes para remoção da melanima não é recomendada, pois pode prejudicar e mesmo causar a perda da marcação com anticorpos Melan-A e HMB-45 (6) . Uma alternativa é a contracoloração com Giemsa, em substituição à hematoxilina de Harris, habitualmente utilizada, que cora a melanina em azul esverdeado (10) .…”

Caracterização clínica e histopatológica de bulbos oculares de cães e gatos (2005-2015)

“…Após a lavagem das lâminas em solução salina tamponada, foram adicionados os reagentes secundário (Biotinilado anti-mouse Ba 2000 -Vector) e terciário (ABC PK 6100 -Vector), incubando-os por 60 e 45 minutos, respectivamente. A reação foi revelada com DAB (Sigma Co., St Louis, EUA) por cinco minutos e contracorada com hematoxilina de Harris na diluição 10:1 (Salvio & Marques 2006 …”

Estudo de distribuição e morfologia dos melanócitos em pele com e sem exposição solar

“…Realizou-se, inicialmente, a reação com o anticorpo monoclonal anti-MelanA/MART-1 revelada pelo cromógeno diaminobenzidina (DAB) com contracoloração pela hematoxilina de Harris. Em um segundo momento, em casos selecionados, foi utilizada a contracoloração com Giemsa, conforme metodologia proposta por Sálvio & Marques em 2006 (11) , para facilitar a distinção entre a positividade da cor marrom acastanhada fornecida pelo cromógeno DAB do pigmento marrom de melanina presente nos ceratinócitos. Essa análise complementar foi realizada em caráter ilustrativo, com o objetivo de verificar, entre as técnicas disponíveis, qual seria a melhor O número médio de melanócitos nos fragmentos de pele do antebraço (área fotoexposta) foi de 7,74 melanócitos/ CGA (DP = 3,31) e, nos da região glútea, área duplamente coberta (fotoprotegida), foi de 4,85 melanócitos/CGA (DP = 1,60).…”