Proposta de um novo modelo experimental de indução de doença inflamatória intestinal

Abstract

RESUMOOBJETIVO: Avaliar as lesões intestinais em ratos imunizados com proteínas intestinais murinas. MÉTODOS: Preparou-se suspensão a 40% de cólon de ratos normais em PBS pH7,4, seguida de maceração, purificação, inativação e eletrofocalização de proteínas. Com esta suspensão 20 ratos Wistar foram imunizados conforme as seguintes fases: sensibilização via SC e IM com antígeno emulsificado em adjuvante completo de Freund. Reforços via IM com suspensão antigênica pura. Nesta fase foram pesquisados anticorpos séricos anti-tecido colônico por imunodifusão e face à positividade, dez ratos foram submetidos à avaliação histológica do cólon e em outros dez, inoculação via IP com suspensão antigênica pura. Após seis dias apresentaram: blefarite, diarréia, apatia, hematoquesia e então submetidos à coleta de amostras do cólon para avaliação histológica. RESULTADOS: A suspensão antigênica apresentou oito bandas de proteínas, entre 100 a 420 kD. Nas amostras de cólon observaram-se histologicamente perda de criptas, edema da camada sub-mucosa e inflamação aguda. CONCLUSÃO: Foi possível reproduzir doença inflamatória intestinal em ratos a partir de imunização com antígenos protéicos intestinais da própria espécie. A presença de anticorpos séricos anti-intestino foi relacionada com as alterações histológicas encontradas no cólon de ratos imunizados. DESCRITORES: Doença inflamatória intestinal. Antígeno colônico. Anticorpos anti-tecido colônico. Ratos. Eletrofocalização. ABSTRACT PURPOSE:To evaluate the bowel lesions of rats after immunization against self intestinal proteins. METHODS: A 40% colonic solution was made in pH 7,4 PBS, followed by maceration, purification, inactivation and SDS-PAGE electrophoresis. Twenty Wistar rats were submitted to the following immunization schedule: Subcutaneous and intramuscular sensibilization with antigen solution emulsified in Freund's complete adjuvant. Intramuscular booster with pure antigen suspension. In this phase, were investigated anti-intestinal antibodies by single radial immunodiffusion and histologic evaluation of colon samples. Challenge by intraperitoneal route with antigenic solution and clinical observation. The animals were sacrificed and had collected colon samples for histologic evaluation. RESULTS:The antigenic suspension presented eight protein with molecular weight between 80 and 420 kD. After six days of the intraperitoneal challenge they had presented: blepharitis, diarrhea, alopecia, apathy and hematochezia. Histological evaluation of this immunological IBD animal model showed ulceration of distal colon, mucosa leucocyte infiltration, edema in submucosa layer and significant crypts degeneration. Anti-intestinal antibodies were present in all of animals. CONCLUSION: It was concluded that was possible to reproduce IBD in rats, as well as the presence of anti-intestinal antibodies was related to histologic features of colon in immunizated rats.

Animal models for inducing inflammatory bowel diseases: integrative review

“…Diversos mecanismos têm sido descritos como causadores destas doenças, que incluem desde fatores psicogênicos até os imunológicos, sem ainda haver consenso entre os autores 4 . Combinados com fatores ambientais, desencadeia-se uma resposta imune exacerbada atípica no intestino, mas capaz de se propagar para outros tecidos e órgãos, induzindo reações extra-intestinais, a saber o acometimento articular, oftalmológico, dermatológico, urológico, hepatobiliar, pulmonar 5 .…”

“…Diante desse contexto, o modelo animal se apresenta como uma ferramenta útil para a melhor compreensão desta doença 8 . Os modelos frequentemente utilizados para simulação de DIIs utilizam ácidos ou substâncias corrosivas diluídas, de forma a induzir alterações histológicas semelhantes às encontradas na doença em humanos 4 . A indução de respostas imunológicas humoral e celular contra constituintes do próprio organismo é um atributo inerente às doenças autoimunes, contudo, a sua indução experimental é pouco relatada.…”