Padronização de condições para detecção de DNA de Leishmania spp. em flebotomíneos (Diptera, Psychodidae) pela reação em cadeia da polimerase

Abstract

A correta identificação dos agentes etiológicos em insetos vetores é de crucial importância aos estudos epidemiológicos. A pesquisa de flagelado nesses vetores, pela dissecção de seu trato digestivo, observação microscópica do seu conteúdo ou por isolamento dos parasitas provenientes de insetos em meios de cultura, tem-se mostrado operacionalmente inadequada e com baixa especificidade do diagnóstico, pois fêmeas de flebotomíneos também podem albergar outros flagelados como Trypanosoma e Endotrypanum. Acreditamos que por sua eficiência e especificidade, a amplificação de seqüências-alvo do DNA da Leishmania, por meio da reação em cadeia de polimerase, pode ser aplicada na investigação de sua presença em flebotomíneos, desde que estes estejam devidamente acondicionados e o DNA do parasita extraído a partir de metodologia adequada. Este trabalho descreve metodologias utilizadas na padronização da conservação dos espécimes de flebotomíneos e extração do DNA da Leishmania como uma alternativa mais prática que os métodos tradicionais.

Leishmaniose tegumentar americana no Litoral Norte Paulista, período 1993 a 2005

“…Além disto, foi constatada a infecção experimental de Nyssomyia intermedia por este agente 14 . Assim, alerta-se para a necessidade de diagnósticos diferenciais dos agentes da LTA no Litoral Norte do Estado de São Paulo.…”

Capacidade vetorial de Lutzomyia (Lutzomyia) cruzi (Diptera: Psychodidae) para Leishmania (Leishmania) infantum

“…A reação em cadeia da polimerase (PCR) é uma das técnicas mais amplamente utilizada na análise de amostras entomológicas de diversas regiões geográficas (ARANSAY et al, 2000;CABRERA et al, 2002;CÓRDOBA-LANÚS et al, 2006;FELICIANGELI et al,1994;SILVA e GRUNEWALD, 1999;PAIVA et al, 2007), por ser uma ferramenta de maior sensibilidade e especificidade na detecção e identificação de Leishmania (SCHONIAN et al, 2003;MANNA et al, 2004). Assim, o presente estudo tem por objetivo investigar infecção natural por Leishmania em flebotomíneos coletados no Município de Corumbá, Mato Grosso do Sul, Brasil.…”

Análise molecular da infecção natural de Lutzomyia longipalpis em área endêmica de leishmaniose visceral no Brasil

“…A taxa de infecção natural mínima foi calculada conforme Paiva et al 5 , e os resultados, analisados conforme o teste exato de Fischer (F) e o teste t de Student (p ≤ 0,05; n-1 graus de liberdade).…”

“…A técnica da dissecação do trato digestivo do vetor e a pesquisa direta do parasito eram empregadas com esta finalidade; atualmente, vem sendo substituída pela reação em cadeia da polimerase (PCR), que consiste na amplificação do DNA do parasito, exibindo elevada especificidade e sensibilidade 5 . Assim, iniciadores moleculares desenhados para L. infantum têm sido empregados para a detecção de L. chagasi, considerando a semelhança molecular e bioquímica entre essas espécies, reforçando a admissão da sinonímia L. infantum chagasi (L. chagasi) 1,6 .…”