Efeito da temperatura de descongelação na integridade de espermatozoides criopreservados de cães

Moura, Cristiane Scavuzzi; Nunes, A. K. S.; Silva, B.S.; Peixoto, Christina Alves; Silva, A.R.; Silva, S.V.; Guerra, Maria Madalena Pessoa

doi:10.1590/s0102-09352013000400017

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“…Perdrix et al (2011), verificaram que a presença de vacúolos com Research, Society andDevelopment, v. 10, n. 14, e265101422064, 2021 (CC BY 4.0) | ISSN 2525-3409 | DOI: http://dx.doi.org/10.33448/rsd-v10i14.22064 tamanho superior a 13% da área total da cabeça não tem relação com a fragmentação do DNA. Dados semelhantes foram encontrados no estudo realizado por Moura et al, (2013).…”

Section: Discussionunclassified

Avaliação da viabilidade espermática de sêmen caprino criopreservado em meio ACP-101c e TRIS acrescido de gema de ovo de Numida meleagris

Macêdo

Teixeira

Nascimento

et al. 2021

RSD

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Um meio diluente ideal para a criopreservação seminal deve suprir as células espermáticas com energia, proteção e manutenção de um ambiente adequado à sua sobrevivência. Objetivou-se avaliar a integridade in vitro do sêmen caprino criopreservado em meio ACP-101c® associado à gema de ovo de Numida meleagris, por meio de duas técnicas de análise individual da célula espermática. Foram colhidos 15 ejaculados de cinco caprinos, com auxílio de uma vagina artificial. Os ejaculados foram reunidos em um pool, e dividido em 12 grupos, sendo dois grupos controles: GC1 TRIS, com adição 2,5% da gema de ovo de Gallus gallus domesticus GOGD, GC2 ACP-101c®, com adição 2,5% da gema de ovo de Gallus gallus domesticus GOGD e dez grupos experimentais GE, contendo a adição da gema de ovo de Numida meleagris. Seguidamente, as alíquotas foram envasadas em palhetas francesas de 0,25 mL e congeladas com auxílio do aparelho TK3000® e armazenadas em nitrogênio líquido. Amostras foram descongeladas após sete dias e avaliadas quanto à integridade do DNA e quanto a sua ultraestrutura individual, por meio do teste cometa e microscopia eletrônica de transmissão, respectivamente. Nos resultados obtidos pelo teste cometa, não foi evidenciado diferença estatística quanto ao comprimento da cauda, entre os grupos TRIS acrescido de GONM, nas concentrações de 2,5%, 5% e 10% em relação ao grupo controle TRIS 2,5% de GOGD. Também não houve diferença estatística quanto ao percentual de fragmentação de DNA na cauda, nos grupos TRIS com 2,5%; 5%; e 20% de GONM em comparação ao grupo controle TRIS 2,5% GOGD (P>0,05). Os grupos ACP® com 10%, 15% e 20% de GONM apresentaram maior comprimento de cauda quando comparados aos grupos ACP com 2,5% e 5% de GONM e grupo controle (ACP® 2,5% de GOGD). Na análise ultraestrutural o grupo ACP® com 10% de GONM, destacou-se com melhor integridade celular frente aos demais grupos, inclusive, frente às amostras avaliadas do grupo controle. Dessa forma, conclui-se que a gema de ovo de Numida meleagris, como crioprotetor externo de membrana, acrescida aos diluentes ACP-101c® ou TRIS, pode reduzir os danos causados durante o processo de criopreservação do sêmen caprino.

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Section: Discussionunclassified

Avaliação da viabilidade espermática de sêmen caprino criopreservado em meio ACP-101c e TRIS acrescido de gema de ovo de Numida meleagris

Macêdo

Teixeira

Nascimento

et al. 2021

RSD

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Ultrastructural description of fresh and frozen/thawed sperm derived from collared peccaries (Pecari tajacu Linnaeus, 1,758)

Bezerra

Souza

Silva

et al. 2018

Microscopy Res & Technique

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The aim was to describe, through scanning electron microscopy (SEM) and transmission electron microscopy (TEM), the ultrastructure of peccaries' fresh and frozen-thawed sperm. For that, semen derived from three mature males was obtained by electroejaculation and evaluated for motility, membrane integrity, membrane functionality, chromatin integrity, and morphology through light microscopy. Samples were frozen using a Tris extender plus egg yolk (20%) and glycerol (6%). Then, fresh and frozen-thawed semen samples were mixed in different sperm pools that were processed for SEM and TEM. Sperm motility, membrane integrity, and functionality were impaired (p < .05) by freezing-thawing procedures, but sperm morphology, and chromatin integrity evaluated by light microscopy were not significantly affected. The SEM revealed that peccaries' sperm presents a flattened head in a paddle format, measuring 6.07 μm in length and 3.84 μm in width, with a vastus acrosome (4.46 μm). Normal tails measure 38.11 μm, being formed by an extensive midpiece with 15.52 μm in length. In frozen-thawed samples, both SEM and TEM provide us information about damage undetected through light microscopy as the presence of vesicles in the acrosome, loose plasma membrane, vacuolized mitochondria, dense fibers disorganized, and decondensed chromatin. In conclusion, we provide the first description of the sperm ultrasctruture in collared peccaries. Moreover, SEM and TEM help us to identify some nanometric damage provoked by freezing-thawing procedures, thus providing valuable information for the improvement of such important protocols used for biobanking formation. K E Y W O R D Sfreezing-thawing, morphology, scanning electron microscopy, semen, Tayassu tajacu, transmission electron microscopy

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Comparison of Cryopreservation Protocols (Single and Two-steps) and Thawing (Fast and Slow) for Canine Sperm

Brito

Lúcio

Angrimani

et al. 2016

Animal Biotechnology

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In addition to the existence of several cryopreservation protocols, no systematic research has been carried out in order to confirm the suitable protocol for canine sperm. This study aims to assess the effect of adding 5% glycerol during cryopreservation at 37°C (one-step) and 5°C (two-steps), in addition of testing two thawing protocols (37°C for 30 seconds, and 70°C for 8 seconds). We used 12 sperm samples divided into four experimental groups: Single-Step - Slow Thawing Group; Two-Step - Slow Thawing Group; Single-Step - Fast Thawing Group; and Two-Step - Fast Thawing Group. Frozen-thawed samples were submitted to automated analysis of sperm motility, evaluation of plasmatic membrane integrity, acrosomal integrity, mitochondrial activity, sperm morphology, sperm susceptibility to oxidative stress, and sperm binding assay to perivitellinic membrane of chicken egg yolk. Considering the comparison between freezing protocols, no statistical differences were verified for any of the response variables. When comparison between thawing protocols was performed, slow thawing protocol presented higher sperm count bound to perivitelline membrane of chicken egg yolk, compared to fast thawing protocol. Regardless of the freezing process, the slow thawing protocol can be recommended for the large scale cryopreservation of canine semen, since it shows a consistent better functional result.

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Efeito da temperatura de descongelação na integridade de espermatozoides criopreservados de cães

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Ultrastructural description of fresh and frozen/thawed sperm derived from collared peccaries (Pecari tajacu Linnaeus, 1,758)

Comparison of Cryopreservation Protocols (Single and Two-steps) and Thawing (Fast and Slow) for Canine Sperm

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