Técnica de citometria de fluxo para avaliação da produção de espécies reativas de oxigênio pelas células do líquido sinovial de eqüinos

Abstract

A citometria de fluxo tem sido amplamente utilizada para se estudar as atividades fagocíticas de macrófagos e neutrófilos em humanos e animais (Bassoe et al., 1983; Johannisson et al., 1995). É considerada conveniente e mais prática que outras técnicas bioquímicas, para estudar a produção de espécies reativas de oxigênio (ERO) produzidas por células durante o processo inflamatório. A metodologia citométrica elimina a necessidade de separação prévia dos leucócitos, que, além de consumir tempo, também ativa per se a explosão oxidativa celular. A produção de ERO expressa na geração de peróxido de hidrogênio dos macrófagos e dos neutrófilos estimulados pode ser monitorada quantitativamente por citometria de fluxo usando o reagente 2'7'diacetato de diclorofluoresceína (DCFH-DA) (Hasui et al., 1989). Também foi demonstrado que a oxidação do DCFH-DA é quantitativamente proporcional à concentração de peróxido de hidrogênio gerado (Hirabayashi et al., 1985 consideração aspecto, quantidade de proteína total, viscosidade, contagem total de células nucleadas e citologia indica a presença ou não de um estado inflamatório intra-articular, mas não permite uma avaliação mais pormenorizada da atividade celular durante o processo inflamatório.Este trabalho teve por objetivo verificar a viabilidade da técnica de citometria de fluxo em quantificar a produção de ERO proveniente das células do líquido sinovial de articulações hígidas e acometidas por artrite em eqüinos.Utilizaram-se sete amostras de líquido sinovial de diferentes animais, colhidas de duas articulações tíbio-társicas (ArTT) e duas metacarpo-falangeanas (ArMF) hígidas, e de duas articulações tíbio-társicas (ArTT) e uma metacarpo-falangeana (ArMF) inflamadas. O líquido sinovial foi analisado segundo Hasui et al. (1985). Para a obtenção do número necessário de células para o ensaio realizaram-se centrifugação e posterior ressuspensão das amostras em solução tampão de fosfato. A magnitude da produção de ERO foi verificada pela técnica de citometria de fluxo utilizando-se um citômetro de fluxo 1 em que a produção de ERO basal e induzida pela Staphylococcus aureus foi quantificada pela intensidade média de fluorescência/célula emitida pelo DCFH analisada pelo software Cell Quest Pro. As populações celulares, tais como linfócitos, neutrófilos, macrófagos e sinoviócitos não

Avaliação dos efeitos antiinflamatórios da proteína antagonista de receptor de interleucina - 1 (IRAP) por citometria de fluxo em líquido sinovial de eqüino

“…Não obstante a ampla variedade de métodos baseados na citometria de fluxo para avaliar simultaneamente a fagocitose e o metabolismo oxidativo de células humanas (SILVEIRA, 2004;SOH, 2006) também já empregados para a avaliação da resposta imune de eqüinos (FLAMINIO et al, 2002;MASSOCO;PALERMO NETO, 2003), somente um estudo foi realizado empregando-o para analisar leucócitos do líquido sinovial de eqüinos (MASSOCO et al, 2006). Este estudo demonstra a viabilidade da técnica de citometria de fluxo em quantificar a produção das EROs proveniente das células do líquido sinovial nesta espécie (MASSOCO et al, 2006).…”