Identificação do estádio adequado para realização de análises isoenzimáticas na caracterização de cultivares de arroz

Abstract

RESUMO -Os sistemas enzimáticos comumente utilizados na caracterização de cultivares são produtos da expressão gênica, e, portanto, altamente influenciados pelo estádio de desenvolvimento da plântula, pelo tecido vegetal e pelo ambiente. Esses fatores normalmente não são considerados no momento de realizar uma análise conjunta de vários sistemas enzimáticos para uma determinada espécie, decorrendo assim numa inadequada e ineficiente leitura e interpretação dos resultados. No presente trabalho objetivou-se determinar o momento adequado no qual cada sistema enzimático apresenta máxima expressão fenotípica para ser utilizado na caracterização isoenzimática de cultivares de arroz. Dois lotes, um de alta e um de baixa qualidade fisiológica, para cada uma das variedades de arroz El Paso L144, IRGA 417 e EEA 406, foram analisados utilizando-se os sistemas enzimáticos Esterase, Fosfatase Ácida, Glutamato Desidrogenase, Glutamato Oxalacetato Transaminase, e Malato Desidrogenase. Seis estádios de desenvolvimento (0, 2, 4, 6, 8 e 10 dias) foram avaliados para a extração de proteínas. Dos resultados obtidos pode se inferir que: cada sistema enzimático analisado apresenta um momento adequado para extração de proteínas; não foi possível identificar um estádio de desenvolvimento onde coincidira a máxima expressão fenotípica de todos os sistemas enzimáticos; a análise simultânea de vários sistemas isoenzimáticos, a partir de uma única extração de proteína não é recomendada. A qualidade fisiológica das sementes da cultivar EEA 406 afetou a análise isoenzimática dos sistemas Esterase e Glutamato Oxalacetato Transaminase.Termos para indexação: Oryza sativa, eletroforese, isoenzimas, qualidade fisiológica, extração de proteínas IDENTIFICATION OF THE ADEQUATE STAGE TO PERFORM ISOENZYMATIC ANALYSIS IN RICE CULTIVAR CHARACTERIZATIONABSTRACT -Enzymatic systems commonly used in cultivar characterization are products of gene expression and are, therefore, highly influenced by development stages, the organ from which they are collected and the environment. Usually, these factors are not considered when several enzymatic complexes are used from a single protein extraction, resulting in an inefficient reading and interpretation of the results. This study was carried out to evaluate the adequate stage for protein extraction for each enzymatic complex, when there is a maximum phenotypic expression, to be used in rice isoenzymatic characterization.

Activity of some isoenzymatic systems in stored coffee grains

“…However this activity is more intense in the grains of natural coffee, and under temperature of 60/40° C and 60° C there was a gradual increase of the enzymatic activity as the storage time increased (Figure 1.2). Probably this occurs due to a more accelerated metabolism, suggesting (MALONE et al, 2006) that most of the reserve material had already been metabolized. This increased activity is associated to the oxidation of lipids, characterizing the degenerative process of cell membranes of stored coffee.…”

“…This increased activity is associated to the oxidation of lipids, characterizing the degenerative process of cell membranes of stored coffee. This occurs because, according to Santos, Menezes and Villela (2005), Malone et al (2006) and Nakada et al (2010), EST is involved both on hydrolysis of esters and on lipids metabolism, like the total phospholipids of membrane.…”

“…Esterase is accumulated before the deteriorative process in order to prevent the action of free radicals (Malone et al, 2006), and under stress conditions its activity, besides characterizing the seed deterioration, may help in the germination process since the fatty acids released from the lipids of this group of hydrolytic enzymes are used on the β-oxidation as energy source for germination (Nakada et al, 2010;Veiga et al, 2010). In this case, the activity is an indicative of higher loss of quality in the grains of coffee in beans.…”

“…However, their catalytic activity depends on the integrity and native conformation of the protein, thus, the structure of enzymes is essential for their activities (Nelson;Cox, 2006). Commonly present similar sequences of aminoacids and in many cases they share the same evolutionary origin (Malone et al, 2006), in the cells of a tissue, in the diverse ontogenetic stages and in different tissues (Pinto et al, 2001). However, the intensity of bands and the isoenzymatic profile are specific of a determined tissue and development stage of the plant.…”

Avaliação do condicionamento fisiológico e aplicação de fósforo em sementes de milheto

“…Fosfatase ácida: para a caracterização do padrão de expressão isoenzimático, quatro amostras de 25 sementes de cada tratamento foram colocadas para germinar sobre folhas de papel toalha, umedecidas com quantidade de água equivalente a 2,5 vezes o peso do papel, a 18°C e a 25ºC. Posteriormente, a matéria vegetal das raízes e folhas primárias de 10 plântulas, avaliadas aos 4 e aos 7 dias no teste de germinação, foi removida e macerada em cadinho de porcelana sobre cubos de gelo e imersa na solução extratora (9 partes de tris-citrato 0,2M, pH 8,3 e 1 parte de borato de lítio 0,2M, pH 8,3 + 0,15% de 2mercaptoetanol), na proporção 3:1 (p.v-1), permanecendo 18 horas em refrigerador, conforme o protocolo de extração empregado por Malone et al (2006;. As amostras foram posteriormente centrifugadas por cinco minutos e 25 µL do sobrenadante foram aplicados em gel de poliacrilamida 6%.…”