Development and application of polymerase chain reaction test for detection of Conidiobolus lamprauges

Abstract

RESUMO.-[Desenvolvimento e aplicação da reação em cadeia da polimerase para detecção de Conidiobolus lamprauges.] A conidiobolomicose é uma doença granulomatosa causada pelo fungo Conidiobolus spp., observada em humanos e animais. As técnicas tradicionais de diagnóstico da doença são o isolamento do agente associado à presença de sinais clínicos típicos e condições patológicas. O objetivo deste trabalho é descrever o desenvolvimento de um teste da reação em cadeia da polimerase (PCR) específico para Conidiobolus lamprauges em amostras clínicas. As amostras de animais suspeitos foram coletadas e submetidas ao isolamento, análise histopatológica e amplificação pela PCR.O DNA de tecidos foi submetido a PCR com os iniciadores universais de fungos baseados no gene 18S rDNA e iniciadores específicos foram concebidos com base no mesmo gene em C. lamprauges que gerou produtos de aproximadamente 540 pb e 222 pb, respectivamente. A cultura foi positiva em 26,6% das amostras clínicas. A técnica de PCR para C. lamprauges mostrou a amplificação de DNA a partir de tecidos frescos (80%) e secções de parafina (44,4%). Em conclusão, a técnica de PCR aqui descrita demonstrou elevada sensibilidade e especificidade na detecção de DNA de fungos em amostras de tecido, proporcionando uma ferramenta rápida para o diagnóstico de C. lamprauges.

Epidemiological, clinical and diagnostic aspects of sheep conidiobolomycosis in Brazil

“…Several authors have suggested the use of molecular biology assays to search DNA sequences of conserved genes in fungal samples, including polymerase chain reaction (PCR) and DNA sequencing of intergenic regions (internal transcribed spacer, ITS) and ribosomal DNA units (18S, 5.8S and 28S rDNA) (DE PAULA et al, 2010;BOTTON et al, 2011;SILVEIRA et al, 2013). DE PAULA et al (2010) andSILVEIRA et al (2013) proposed the use of PCR to amplify the 18S rDNA region of pathogenic Conidiobolus. SILVEIRA et al (2013) confirmed the difficulty in identifying this microorganism in fungal culture, which was possible only in 26.6% from clinical samples.…”

“…DE PAULA et al (2010) andSILVEIRA et al (2013) proposed the use of PCR to amplify the 18S rDNA region of pathogenic Conidiobolus. SILVEIRA et al (2013) confirmed the difficulty in identifying this microorganism in fungal culture, which was possible only in 26.6% from clinical samples. These authors also highlighted the importance of the use of molecular techniques for the definitive diagnosis of ovine conidiobolomycosis.…”

Doenças da cavidade nasal em pequenos ruminantes no Distrito Federal e no Estado de Goiás

“…O produto da extração foi submetido a reação da polimerase em cadeia com primer universal para fungo e depois com primer específico para Conidiobolus lamprauges, ambos baseados no gene 18S ribossomal (GenBank GQ478281.1) (Silveira et al 2013). Para a técnica de IHQ foram utilizadas lâminas silanizadas com seções histológicas de 3 µm.…”

Proteínas imunorreativas de Conidiobolus lamprauges isoladas de ovinos infectados naturalmente

“…O diagnóstico da doença tem como princípio os achados epidemiológicos, clínico-patológicos associados ao isolamento do agente em cultivo com a classificação definitiva realizada através de técnicas moleculares como a PCR (Prophet et al 1992, Ribes et al 2000, Riet-Correa et al 2008, Vilela et al 2010, De Paula et al 2010, Ubiali et al 2013, Silveira et al 2013.…”