Uso de PCR e sequenciamento do rDNA 16S para identificação de bactérias do gênero Staphylococcus isoladas de mastite bovina

Abstract

O objetivo deste trabalho foi identificar espécies de Staphylococcus (n=100) isoladas de mastite em rebanhos bovinos do Estado de Minas Gerais. Para esta finalidade foram utilizadas reações de PCR empregando oligonucleotídeos iniciadores descritos anteriormente para amplificar genes específicos de S. aureus (femA), S. intermedius (rDNA 16S) e S. hyicus (rDNA 16S-23S) e o sequenciamento do rDNA 16S. De acordo com as reações de PCR, 83 isolados foram identificados como S. aureus, 13 isolados como S. intermedius, dois como S. hyicus e dois isolados não foram identificados. Foram submetidos ao sequenciamento do rDNA 16S seis isolados identificados como S. aureus e os 17 restantes. Os seis isolados identificados como S. aureus confirmaram essa identificação. Dos outros 17 isolados, 13 foram identificados como S. chromogenes e quatro como S. hyicus, com similaridade igual ou superior a 99%. Baseando-se nos resultados da reação de PCR do gene femA e do sequenciamento do rDNA 16S, foram identificados 83 S. aureus, 13 S. chromogenes e quatro S. hyicus. Neste estudo os oligonucleotídeos iniciadores empregados na reação de PCR para S. intermedius não foram específicos, pois amplificaram também S. chromogenes; e os empregados na reação de PCR para S. hyicus não foram sensíveis, pois falharam na identificação de dois isolados de S. hyicus. A identificação definitiva das duas últimas espécies somente foi possível pelo sequenciamento do rDNA 16S.

Species-level identification of staphylococci isolated from bovine mastitis in Brazil using partial 16S rRNA sequencing

“…In Brazil, studies have been conducted to identify CoNS isolated from bovine mastitis, and few of these studies (Santos et al, 2008;Lange et al, 2011) have used molecular techniques. Thus, the aim of the present study was to identify coagulase-positive and coagulase-negative Staphylococcus species isolated from bovine mastitis in Brazil using partial 16S rRNA gene sequencing.…”

Isolamento de Streptococcus agalactiae em diferentes órgãos de tilápias do nilo (Oreochromis niloticus) criadas em tanques-rede

“…A fim de se obter maior precisão na identificação de S. agalactiae, podem-se utilizar técnicas de biologia molecular que permitam relacionar os resultados dos testes fenotípicos e genotípicos (LANGE et al, 2011). Umas dessas técnicas é o sequenciamento do gene do RNA ribossomal 16S, amplamente utilizado com finalidade taxonômica e filogenética e que consiste na análise comparativa da sequência de determinados genes de macromoléculas conservadas como o RNA ribossomal (BECKER et al, 2004).…”

“…Umas dessas técnicas é o sequenciamento do gene do RNA ribossomal 16S, amplamente utilizado com finalidade taxonômica e filogenética e que consiste na análise comparativa da sequência de determinados genes de macromoléculas conservadas como o RNA ribossomal (BECKER et al, 2004). As sequências encontradas são comparadas com aquelas depositadas em bancos de dados, como o National Center for Biotechnology Information (NCBI) (LANGE et al, 2011). …”

Toxigenic Staphylococcus aureus in processing of coalho and mozzarella cheese

“…Among these, 77 were characterized as S. aureus by biochemical tests but 83 strains amplified the femA gene (Lange et al, 2011).…”