Avaliação da patogenicidade de amostras de Brachyspira pilosicoli através de técnicas histopatológicas convencionais e por imuno-histoquímica

Abstract

O presente trabalho avaliou diferenças de patoge-nicidade entre 19 cepas de Brachyspira pilosicoli isoladas de casos de diarréia em suínos no Estado do Rio Grande do Sul, usando um modelo de infecção oral de pintos de um dia. Os animais foram inoculados com uma suspensão de bactérias vivas, 21 dias após foram sacrificados e os cecos examinados por histopatologia através da hematoxilina-eosina, coloração pela prata e a imuno-histoquímica usando um anticorpo policlonal anti-Brachyspira pilosicoli. Com o uso das técnicas da prata e da imuno-histoquímica, respectivamente, 21,59% e 70,96% dos pintos mostraram colonização do epitélio do ceco por B. pilosicoli. Houve diferenças no tipo de colonização, ocorrendo aderência contínua, focal ou presença de bactérias livres na luz intestinal. A imuno-histoquímica foi considerada superior para a avaliação da colonização intestinal, pois foi capaz de detectar 49,37% de animais colonizados a mais do que com o uso da coloração pela prata. Em três cepas foram observadas figuras alongadas dentro do citoplasma das células epiteliais cecais de aves inoculadas.

Identification of Brachyspira spp. in the cecum of broiler chickens using histology and in situ diagnostic assays

“…Positive immunoreactivity was present mainly in the lumen of crypts similar to that observed by Venkatakrishnan (2017), who visualized B. hyodysenteriae in the colon of pigs using immunofluorescence, which resulted in strong labeling of the bacterium in the lumen of intestinal crypts in close association with the epithelium and in the goblet cells. Paulovich et al (2004), in an experimental infection with B. pilosicoli of one-day-old chicks, observed positive immunoreactivity in the intestinal epithelium toward the lumen, forming a dark border composed of the spirochetes (false brush border). This colonization pattern was also observed in the samples used in this study.…”

“…Another pattern found in the IHC samples was the presence of free spirochetes in the intestinal lumen. Paulovich et al (2004) have speculated that the histopathological processing could have caused the presence of bacteria in the intestinal lumen. Artifacts of sample processing could be considered among the factors that could explain this "shedding" of adhered bacteria.…”

Necrotic enterocolitis in pigs naturally infected by porcine circovirus type 2

“…(PAULOVICH et al, 2004) was performed. Double IHC for simultaneous demonstration of PCV2 and cytokeratin (DAKO-pancytokeratin, 1:200 dilution) was applied with diaminobenzidine and alkaline phosphatase as chromogens, respectively.…”

Investigação de Brachyspira hyodysenteriae e Brachyspira pilosicoli em suínos com diarreia no estado do Espírito Santo

“…A coloração pela prata é uma técnica altamente inespecífica, pois ela permite somente a visualização da morfologia da bactéria indicando que se trata de uma espiroqueta, e devem-se associar a esses achados os dados clínicos e as alterações macroscópicas para um diagnostico final de Brachyspira spp. (PAULOVICH et al, 2004;VIOTT, 2010). Já a imuno-histoquímica permite a detecção do gênero Brachyspira utilizando anticorpos monoclonais ou policlonais específicos, sem diferenciação entre espécies patogênicas ou apatogênicas (HAMPSON et al, 2006).…”