Caracterização de amostras atenuadas do vírus da Diarréia Viral Bovina (BVDV) tipos 1 e 2 para uso em vacinas

Abstract

Este artigo relata a caracterização de duas amostras citopáticas do vírus da Diarréia Viral Bovina (BVDV-1: IBSP-2; BVDV-2: SV-253) submetidas à atenuação por múltiplas passagens em cultivo celular e exposição à radiação ultravioleta. As amostras foram caracterizadas in vitro (tamanho e morfologia de placas, cinética de replicação e perfil antigênico) e in vivo (atenuação e resposta sorológica em bovinos). A caracterização in vitro de populações clonadas dos vírus obtidas nas diferentes passagens em cultivo celular (0, 1, 10, 20 e 30), demonstrou que o processo de atenuação não afetou negativamente as características antigênicas e fenotípicas das amostras. Não foram observadas alterações significativas no tamanho e morfologia de placas e na cinética de replicação. A reatividade com 48 anticorpos monoclonais demonstrou que o perfil antigênico não doi alterado durante as sucessivas passagens in vitro. A inoculação intramuscular dos clones de vírus obtidos na passagem 30 (IBSP-2: 10(7,3) DICC50; SV-253: 10(6,8) DICC50) em 12 novilhas soronegativas com idade média de 15 meses, não resultou em sinais clínicos, comprovando sua atenuação. Após a inoculação, o vírus foi detectado em leucócitos da maioria dos animais inoculados (10/12) entre os dias 3 e 6 pós-inoculação (pi) e em secreções nasais de três animais (dias 4, 7 e 8pi). No entanto, não ocorreu transmissão dos vírus vacinais aos três animais soronegativos mantidos como sentinelas. Todos os animais vacinados soroconverteram aos 14 dias pós-vacinação (dpv). Títulos moderados a altos de anticorpos neutralizantes foram detectados frente a 5 isolados brasileiros do BVDV-1 (títulos de 80 a > 1280) e quatro isolados do BVDV-2 (títulos de 20 a 640). Em geral, os títulos foram de magnitude superior frente a isolados brasileiros do BVDV-1. Aos 240dpv, os animais receberam uma segunda dose dos vírus vacinais (IBSP-2: 10(7,3) DICC50; SV-253: 10(6,8) DICC50). A revacinação induziu uma resposta secundária na maioria dos animais, resultando em um aumento dos títulos de anticorpos neutralizantes principalmente frente ao BVDV-2. Esses resultados são promissores no sentido da utilização dessas amostras na formulação de vacinas atenuadas para o controle da infecção pelo BVDV no Brasil.

Proteção fetal contra o vírus da diarréia viral bovina (BVDV) em vacas prenhes previamente imunizadas com uma vacina experimental atenuada

“…Essa vacina já havia sido previamente avaliada, demonstrando ser capaz de conferir proteção fetal em ovelhas prenhes (Brum et al 2002), além de ser suficientemente atenuada e altamente imunogênica para bovinos (Lima et al 2004). Assim, essa formulação vacinal e o protocolo de vacinação utilizado apresentamse como alternativas promissoras para a redução das perdas reprodutivas causadas pela infecção pelo BVDV no Brasil.…”

“…Os vírus vacinais foram obtidos por múltiplas passagens (n=30) em cultivo celular, associado com clonagem biológica e mutagênese física (radiação ultravioleta) (Brum et al 2002) e foram previamente testados em relação a imunogenicidade e proteção fetal em ovelhas prenhes (Brum et al 2002) e atenuação e imunogenicidade em bezerros (Lima et al 2004). O presente experimento foi delineado para testar a eficácia dos vírus vacinais em conferir proteção fetal em vacas prenhes, mantidas a campo e desafiadas com uma suspensão viral contendo uma alta dose de vírus heterólogos dos dois genótipos.…”

“…No presente estudo, a vacinação em duas doses -pro-tocolo testado anteriormente com sucesso (Brum et al 2002, Lima et al 2004) -induziu títulos médios e altos de anticorpos na grande maioria dos animais, com poucas exceções (Quadro 1). Considerando-se o título de 80, sugerido como mínimo para conferir proteção clínica (Dubovi 1992, Ridpath 2005, apenas uma vaca (#35) apresentava título inferior, frente ao BVDV-2.…”

“…Esse achado já havia sido relatado anteriormente (Brum et al 2002, Lima et al 2004) e provavelmente reflete uma maior capacidade replicativa in vivo da cepa vacinal de BVDV-1. Outro achado sorológico interessante, também já relatado anteriormente, foi a grande variação individual dos títulos de anticorpos induzidos pela vacinação (Vogel et al 2001, Brum et al 2002, Lima et al 2004. Em resumo, esses resultados demonstraram a capacidade da vacina experimental em induzir títulos neutralizantes de grande magnitude, na grande maioria dos animais imunizados.…”

“…No intuito de produzir uma vacina mais efetiva, Brum et al (2002) demonstraram que duas amostras de BVDV atenuadas por métodos tradicionais foram capazes de induzir resposta sorológica de amplo espectro e induziram proteção fetal em ovelhas prenhes. Essas mesmas amostras demonstraram ser suficientemente atenuadas e induziram boa resposta sorológica em bovinos (Lima et al 2004).…”