RESUMO -Diversos compostos químicos são utilizados na formulação de detergentes, entre eles estão os surfactantes. Entre os mais utilizados por essa indústria está o LAS (Alquilbenzeno Sulfato Linear), um surfactante sintético com elevada taxa de toxicidade ao meio ambiente. A utilização de enzimas em uma formulação de detergente pode diminuir ou até substituir as concentrações desses compostos, tornando a nova formulação mais sustentável. O objetivo deste trabalho tem como analisar três variáveis: concentrações de surfactantes, temperaturas e tempos de exposição, a fim de determinar a melhor atividade enzimática de protease obtida. O delineamento composto central rotacional (DCCR) do tipo 2 3 foi utilizado. O estudo demonstrou que as proteases produzidas pelo Bacillus sp SMIA-2, cultivado em cultura submersa, quando submetida a concentrações mais baixa de surfactante, apresenta melhor atividade enzimática de protease em temperaturas mais elevadas. Porém, em temperatura mais branda, essa concentração precisa ser aumentada para melhor resposta.