Un método reproducible para obtener peg biramificado monofuncional de alta pureza

Abstract

Recebido em 28/5/08; aceito em 4/2/09; publicado na web em 3/7/09 A REPRODUCIBLE METHOD FOR OBTAINING A 2-ARMS MONOFUNCTIONAL PEG WITH HIGH PURITY. PEGylation has become a widely applied technique to enhancing in vitro and in vivo stability of therapeutic proteins and to increasing materials biocompatibility. PEG branched structures have proven useful for protein and peptide modification. Furthermore, they may be better than linear structures for many purposes. This paper describes an improved procedure for obtaining 2-arms PEG based on L-lysine. The efficiency of the synthesis was not related to moisture of the raw materials. This procedure does not use hazardous reagents as previous protocols do. It implemented a purification process for obtaining the desired structure with high purity (> 99%). Finally, the procedure described here allows the obtaining of others PEGylation reagents.Keywords: PEGylation; branched PEG; interferon. INTRODUCCIÓNEl polietilenglicol (PEG) es un homopolímero sintético obtenido a partir del óxido de etileno. La habilidad única del PEG de ser soluble tanto en agua como en solventes orgánicos permite que pueda ser funcionalizado fácilmente y que la conjugación química a biomoléculas pueda hacerse en condiciones suaves que no afecten a éstas. 1 Estudios del PEG en solución acuosa han demostrado que este polímero une 2-3 moléculas de agua por unidad de óxido de etileno. Debido a su alta flexibilidad y a la unión de las moléculas de agua el PEG actúa como si fuera 5-10 veces más grande que una proteína soluble de masa molecular comparable. Se ha sugerido que estas propiedades son las responsables de que el PEG: precipite las proteínas; excluya a las proteínas y células de las superficies; reduzca su inmunogenicidad y antigenicidad y prevenga la degradación de las proteínas por enzimas y células de mamíferos. 2 Debido a estas características, la conjugación a polietilenglicol, conocida como PEGilación, se usa ampliamente para: aumentar la estabilidad in vitro e in vivo de proteínas terapéuticas, disminuir la adsorción de proteínas y células en la superficie de biomateriales, aumentar el tiempo de vida en el organismo de liposomas, entre otras muchas aplicaciones. 2 Los primeros trabajos de PEGilación se realizaron en la década de los ´70. La posibilidad teórica de usar la conjugación a PEG de las proteínas, para disminuir la inmunogenicidad de éstas, se le ocurrió a Frank F. Davis en 1967 mientras preparaba la solicitud de financiamiento para un proyecto sobre aplicación terapéutica de proteínas no humanas. 3 No obstante, no es hasta inicios de los ´90 cuando se aprueba el uso en humanos de las primeras proteínas PEGiladas (Adenosin Deamidasa y Catalasa de Hígado Bovino). 4 Los estudios realizados durante los ´80 y los ´90 demostraron que la mayor utilidad de la PEGilación es en el aumento del tiempo de vida media en sangre de las proteínas conjugadas y no en la disminución de la inmunogenicidad de éstas.Existen diversos procedimientos para obtener reactivos para PEGilar con variadas estruc...

mPEG–NHS carbonates: Effect of alkyl spacers on the reactivity: Kinetic and mechanistic insights

“…With key hydroxyl polymers 4a–e in hand from our previous work, we decided to extend the utility of these materials to the synthesis of carbonates 3. After some experimentation, we found that alcohols 4a–e were cleanly converted to the required ester carbonate 3a–e (Figure ) when the reaction was performed in a dichloromethane–acetonitrile solvent mixture using pyridine as base . After simple precipitation workup to eliminate low‐molecular‐weight impurities, high yields of mPEG carbonates 3a–e were obtained (Figure , 62–99%).…”