Clonagem e purificação de fragmento da proteína capsidial de Banana streak OL virus

Abstract

Resumo -O objetivo deste trabalho foi clonar e induzir a expressão de fragmento da proteína capsidial de Banana streak OL virus (BSOLV-CP) em Escherichia coli, bem como purificar a proteína recombinante obtida. Empregou-se um par de iniciadores específicos para amplificar, em PCR, um fragmento de aproximadamente 390 pb, da região codificadora da porção central da BSOLV-CP. O fragmento obtido foi clonado em vetor pGEM-T Easy, subclonado em vetor pQE-30 e transformado em células de E. coli M15 (pREP4) por choque térmico. A expressão da proteína foi induzida por tiogalactopiranosídeo de isopropila (IPTG), e a proteína recombinante BSOLV-rcCP de 14 kDa foi detectada em Western blot e Dot blot. A expressão da proteína BSOLV-rcCP abre novas possibilidades para a obtenção de antígenos para a produção de antissoros contra o BSOLV.Termos para indexação: Badnavirus, Escherichia coli, Musa, antissoro, bananeira, expressão de proteínas recombinantes. Cloning and purification of Banana streak OL virus coat protein fragmentAbstract -The objective of this work was to clone and to induce the expression of a fragment of Banana streak OL virus coat protein (BSOLV-CP) in Escherichia coli, as well as to purify the obtained recombinant protein.Two specific primers were used for the PCR-amplification of approximately 390-bp fragment of the codifying region of the BSOLV-CP central portion. The obtained fragment was cloned in pGEM-T Easy vector, subcloned in pQE-30 expression vector and transformed into competent E. coli M15 (pREP4) cells by heat shock. The protein expression was induced by isopropyl thiogalactopyranoside (IPTG) and the 14-kDa BSOLV-rcCP recombinant protein was detected in Western and Dot blotting. The expression of the BSOLV-rcCP protein enables new approaches to the obtention of antigens for the antisera production against BSOLV.

Episomal detection of Banana streak OL virus in single and mixed infection with Cucumber mosaic virus in banana 'Nanicão Jangada'

“…Also, there is a report of a PCR detection of a BSOLV isolate from banana 'Terra Ana' (AAB) from São Paulo state (Lombardi at al., 2010).…”