Objetivou-se analisar o ambiente de trabalho favorável à prática profissional de enfermeiros em hospital universitário público. Estudo transversal e quantitativo, realizado com 60 enfermeiros assistenciais, com o questionário Nursing Work Index – Revised. Os dados foram coletados entre novembro 2014 e janeiro de 2015. Dentre os pesquisados, 45 (75%) enfermeiros consideravam-se satisfeitos com seu trabalho. Todos os 12 setores da instituição apresentaram características favoráveis à prática do enfermeiro nos aspectos de suporte dos gestores, autonomia e controle dos processos de trabalho, sobretudo nas unidades de Transplante de Medula Óssea e a Unidade de Doenças Infectocontagiosas, que se diferenciavam por serem especializadas e com menor de rotatividade de funcionários. A relação médico-enfermeiro foi destacada como um dos pontos críticos, obtendo escores mais insatisfatórios. Conclui-se que a análise de características que favorecem a prática profissional do enfermeiro pode ampliar a discussão de estratégias que contribuam para o trabalho em Enfermagem em serviços de saúde.