A new continuous cell line from the mosquito Psorophora confinnis (Diptera: Culicidae) and its susceptibility to infections with some arboviruses

Bello, Felio J.; Rodrı́guez, Jaime A.; Escovar, Jesús; Olano, Víctor Alberto; Morales, Alberto; González, Martha; Rey, Gloria

doi:10.1590/s0074-02762001000600022

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“…Con los huevos de Ae. aegypti, cepa Riohacha, La Guajira-Colombia, utilizados en el presente trabajo para la obtención de cultivos primarios, el tiempo óptimo de incubación fue deconcordancia con las cantidades utilizadas en trabajos previos (17,44).…”

Section: Discussionunclassified

“…Si bien, esta característica de crecimiento lento de las células, en la etapa de iniciación de los cultivos, ha sido común al utilizar otras especies de mosquitos (14,16,17,45,46), probablemente, también contribuyó a la interferencia del crecimiento celular la adición de albendazol al medio de cultivo, usado durante un tiempo prolongado. Esta droga fue empleada porque previamente había demostrado actividad contra microsporidios, tanto en ensayos in vitro de infecciones inducidas (47)(48)(49), como en infecciones naturales de embriones utilizados en explantes para obtener cultivos celulares (16).…”

Section: Discussionunclassified

“…La forma de proliferación y crecimiento celular, a partir de vesículas, también ha sido registrada en otros trabajos de cultivos celulares de mosquitos (10,17,50).…”

Section: Discussionunclassified

“…En forma similar, en trabajos previos, se ha registrado la heterogénea morfología celular en la iniciación de cultivos in vitro en esta misma especie (8)(9)(10), al igual que en otros mosquitos (14,17,22,23,45). Sin embargo, en los cultivos celulares de insectos, después de muchos subcultivos en serie existe la tendencia al predominio de una determinada forma celular, la cual se mantiene indefinidamente en la línea.…”

Section: Discussionunclassified

“…aegypti; posteriormente, se establecieron otras líneas celulares de esta misma especie obtenidas, en orden cronológico, por Singh en 1967 (10), Peleg en 1968 (11,12) (14)(15)(16)(17).…”

unclassified

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Características de nuevos cultivos celulares derivados de tejidos embrionarios de Aedes aegypti (Diptera: Culicidae).

Silva¹,

Escovar²,

Bello³

2005

biomedica

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Introducción. Los cultivos celulares de insectos son una metodología útil en estudios biomédicos y tecnológicos. Objetivo. El propósito principal del presente trabajo fue obtener y caracterizar cultivos celulares derivados de tejidos embrionarios de Aedes aegypti. Materiales y métodos. Se emplearon huevos embrionados para los explantes de tejidos en los medios de cultivos MM/VP12 y L-15/Grace, con suplemento de 20% de suero fetal bovino y una mezcla al 1% de antibiótico y antimicótico, con un rango de pH entre 6,8 y 7,0. Los cultivos se incubaron a una temperatura de 28 o C sin atmósfera de CO 2 . Resultados. El crecimiento celular se obtuvo en el medio L-15/Grace, 3 semanas después de haber sido sembrados los tejidos embrionarios; sin embargo, se necesitaron 6 meses para la formación de la monocapa confluente. Desde agosto de 2003 hasta junio de 2004, se habían realizado 28 subcultivos. Las células se caracterizaron morfológicamente; predominaron las formas epitelioides en subcultivos de pases altos. También se reconocieron las particularidades morfométricas del cariotipo y, además, se determinaron los perfiles isoenzimáticos y moleculares de los cultivos celulares, los cuales se compararon con muestras de adultos de la especie tomadas de la misma colonia y con líneas celulares derivadas de otros insectos. Discusión. Estas células representan, potencialmente, un importante sistema in vitro en investigaciones básicas y aplicadas. Palabras clave: Aedes aegypti, cultivos celulares, vesículas, cariotipos, isoenzimas, RAPD-PCR.Characteristics of new cell cultures derived from embryonic tissues of Aedes aegypti (Diptera: Culicidae) Introduction. Cell cultures from insects are a useful methodology in technological and biomedical studies.Objective. The present work was aimed at obtaining and characterizing cell cultures derived from Aedes aegypti embryonic tissues. Materials and methods. Embryonated eggs were used for embryonic tissue explants in L-15/ Grace and MM/VP12 culture media, supplemented with 20% fetal bovine serum and a mixture of 1% antimycotic and antibiotics, at a pH ranging from 6.8 to 7.0. The incubation temperature was 28 o C; a CO 2 atmosphere was not required. Results. Cell growth was obtained in L-15/Grace medium three weeks after embryonic tissues explants. Six months were required for achieving a confluent monolayer. Twenty-eight serial cell subcultures were carried out from August 2003 to June 2004. Cell morphology was characterized as epithelial in the later subcultures. Karyotype morphometry as well as molecular and isozymatic profiles were established. The cultures were compared with adult samples from the species taken from the same colony and with cell lines derived from other insects.

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Section: Discussionunclassified

“…La forma de proliferación y crecimiento celular, a partir de vesículas, también ha sido registrada en otros trabajos de cultivos celulares de mosquitos (10,17,50).…”

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“…aegypti; posteriormente, se establecieron otras líneas celulares de esta misma especie obtenidas, en orden cronológico, por Singh en 1967 (10), Peleg en 1968 (11,12) (14)(15)(16)(17).…”

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Silva¹,

Escovar²,

Bello³

2005

biomedica

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Establishment and characterization of a new Aedes aegypti (L.) (Diptera: Culicidae) cell line with special emphasis on virus susceptibility

Sudeep

Parashar

Jadi

et al. 2009

In Vitro Cell.Dev.Biol.-Animal

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A new cell line from the neonate larvae of Aedes aegypti (L) mosquito was established and characterized. The cell line at the 50th passage (P) level consisted of three prominent cell types, i.e., epithelial-like cells (92%), fibroblast-like cells (7%), and giant cells ( approximately 1%). Karyological analysis showed diploid (2n = 6) number of chromosomes in >75% cells at P-50. The growth kinetics studied at 52nd passage level showed approximately tenfold increase in cell number over a 10-d study period. The species specificity studies using DNA amplification fingerprinting profile analysis using RAPD primers demonstrated 100% homology with the host profile showing the integrity of the cell line. Electron microscopy revealed the absence of mycoplasma or other adventitious agents. The cell line supported the multiplication of seven arboviruses, i.e., Chikungunya (CHIK), Japanese encephalitis, West Nile, dengue 2 (DEN-2), Chandipura, vesicular stomatitis, and Chittoor viruses. The cell line did not replicate Ganjam and Kaisodi viruses. CHIK virus yield in the new cell line was approximately 3log and 0.5log 50% tissue culture infective dose (TCID(50))/mL higher than Vero E6 and C6/36 cell lines, respectively. In the case of DEN-2 virus, it yielded 1log TCID(50)/mL higher than Vero E6, but lesser than C6/36 cell line. Due to its high susceptibility to a broad spectrum of viruses, the new cell line may find application in virus isolation during epidemics and in antigen production.

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Establishment and characterization of two new cell lines from the mosquito Armigeres subalbatus (Coquillett) (Diptera: Culicidae)

Hoshino

Isawa

Kuwata

et al. 2015

In Vitro Cell.Dev.Biol.-Animal

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Armigeres subalbatus (Coquillett) is a medically important mosquito and a model species for immunology research. We successfully established two cell lines from the neonate larvae of A. subalbatus using two different media. To our knowledge, this is the first report of an established Armigeres mosquito cell line. The cell lines, designated as Ar-3 and Ar-13, consist of adherent and diploid cells with compact colonies. Both these cell lines grow slowly after passage at a split ratio of 1:5 and a population doubling time of 2.7 and 3.0 d, respectively. Random amplified polymorphic DNA polymerase chain reaction (RAPD-PCR) was used to confirm that these lines correspond to the species of origin and are clearly distinct from seven other insect cell lines. Furthermore, reverse-transcription PCR was used to demonstrate that the Ar-3 cell line is susceptible to the Japanese encephalitis virus and two insect flaviviruses associated with Culex and Aedes mosquitoes but relatively insensitive to dengue virus. These data indicate that the newly established cell lines are cellular models of A. subalbatus as well as beneficial tools for the propagation of viruses associated with the Armigeres mosquito.

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A new continuous cell line from the mosquito Psorophora confinnis (Diptera: Culicidae) and its susceptibility to infections with some arboviruses

Abstract: A new cell line, PC-0199-BR, was established from embryonated eggs of the mosquito

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Características de nuevos cultivos celulares derivados de tejidos embrionarios de Aedes aegypti (Diptera: Culicidae).

Características de nuevos cultivos celulares derivados de tejidos embrionarios de Aedes aegypti (Diptera: Culicidae).

Establishment and characterization of a new Aedes aegypti (L.) (Diptera: Culicidae) cell line with special emphasis on virus susceptibility

Establishment and characterization of two new cell lines from the mosquito Armigeres subalbatus (Coquillett) (Diptera: Culicidae)

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