Potencial antiviral e virucida da melitina e apamina contra herpesvírus bovino tipo 1 e vírus da diarreia viral bovina

Abstract

RESUMO: A busca por alternativa aos fármacos sintéticos têm revelado descobertas no campo da farmacologia e, nesse sentido, melitina e apamina, dois constituintes do veneno de abelhas, foram descritas com várias ações farmacológicas. Este estudo objetivou avaliar in vitro as capacidades antiviral e virucida destes componentes. Para tanto, células MDBK (Madin Darby Bovine Kidney), após verificação das respectivas doses tóxicas por ensaio MTT ((3-(4,5 dimetiltiazol-2yl)-2-5-difenil-2H tetrazolato de bromo), foram cultivadas em microplacas e tratadas com diferentes concentrações de apamina, melitina e sua associação. Esse tratamento ocorreu antes e após a infecção com 0,1 MOI (multiplicidade de infecção) de cepas citopatogênicas de herpesvírus bovino tipo 1 (BoHV-1) cepa Los Angeles e vírus da diarreia viral bovina (BVDV) cepa NADL. Após incubação por 72 horas, 37oC, as células foram submetidas ao ensaio MTT para estimativa da viabilidade celular. Em experimento paralelo, placas que foram submetidas ao mesmo procedimento sofreram ciclo de congelamento e descongelamento das células, para rompimento das mesmas e mensuração dos títulos virais. O ensaio virucida foi realizado incubando-se suspensões de BoHV-1 e BVDV com as soluções de apamina, melitina e associação por 24 horas a 37oC e 22oC. O título viral foi avaliado às 0 horas, 1, 2, 4, 8 e 24 horas de incubação. A concentração citotóxica para 50% das células (CC50) de melitina foi 2,32 μg/ml e apamina não demonstrou toxicidade à maior concentração testada (100μg/ml). Houve efeito antiviral da melitina sobre BoHV-1, especialmente na concentração de 2μg/ml, onde observou-se 85,96% de viabilidade celular quando o tratamento foi realizado antes da infecção e 86,78% de viabilidade quando o tratamento foi realizado após a infecção. Houve ainda redução de 90% das partículas virais de BoHV-1. Em menores concentrações (1 e 1,5μg/ml) de melitina não houve atividade antiviral, pois a viabilidade celular foi baixa, demonstrando efeito citopático do vírus. Na associação das duas substâncias houve queda no título de BVDV e observou-se maior viabilidade celular quando comparados à ação isolada dos composto sobre este vírus. Isso se confirma na atividade virucida, uma vez que houve decréscimo de 90% das partículas virais de BVDV com a associação dos dois compostos do veneno de abelhas. Atuando individualmente, melitina apresentou efeito antiviral e virucida frente ao BoHV-1, zerando seu título em apenas 2 horas a 37oC. Conclui-se que melitina tem ação antiviral e virucida frente ao BoHV-1 e sua associação com apamina potencializou seus efeitos frente ao BVDV.

Estudo sobre a atividade biológica da melitina e apamina

“…A busca pelo desenvolvimento de novos fármacos a partir de substâncias naturais, fez com que a comunidade científica desenrolasse diversos estudos baseados na aplicação de melitina e apamina com potencial uso terapêutico. Picoli et al (2018) promoveram um estudo da aplicação de melitina e apamina, tanto isoladas como sua associação, frente ao herpevirus bovino tipo 1 (BoHV-1) e vírus da diarréia bovina (BVDV), objetivando observar as atividades virucida e antiviral. As concentrações testadas de apamina isolada não apresentaram resultados satisfatórios, no entanto, sua associação com a melitina promoveu a amplificação da resposta frente ao BVDV.…”

Melittin: a venom-derived peptide with promising anti-viral properties

“…Melittin had no satisfactory anti-viral activity against BVDV, before and after infection of Madin-Darby bovine kidney cells with the virus (multiplicity of infection; MOI = 0.1). Intriguingly, combinations of melittin with bee venom-derived apamin were superior against BVDV than each agent alone, highlighting that apamin potentiates anti-BVDV efficacy of melittin [33]. Based on these findings, it is sensible to combine melittin with other available anti-viral drugs to ascertain whether the new combinations can abolish Flavivirus infectivity.…”

“…Very recently, Picoli et al investigated anti-viral effects of melittin on bovine viral diarrhea virus (BVDV) [33], the causative agent of bovine viral diarrhea which leads to considerable financial losses in many beefexporting countries [54]. Melittin had no satisfactory anti-viral activity against BVDV, before and after infection of Madin-Darby bovine kidney cells with the virus (multiplicity of infection; MOI = 0.1).…”

“…A new investigation [33] revealed the potential antiviral effects of melittin on bovine herpesvirus type 1 (BoHV-1, Los Angeles strain). Administration of melittin (2 μg/mL) on Madin-Darby bovine kidney cells before and after infection with BoHV-1 (MOI = 0.1) resulted in marked reduction of viral titers.…”

“…Administration of melittin (2 μg/mL) on Madin-Darby bovine kidney cells before and after infection with BoHV-1 (MOI = 0.1) resulted in marked reduction of viral titers. In light of virucidal kinetics, complete obliteration of BoHV-1 was achieved after a 2-h incubation of the virus with 25 μg/mL of melittin at 37°C [33], implying rapid anti-viral effects of melittin. Given that melittin curtails the infectivity of HSV in several ways, it is imperative to evaluate its anti-viral effectiveness against other members of Herpesviridae as well.…”