Isoenzyme and molecular approach for authenticating and monitoring of animal cell lines

Abstract

Authentication of cell lines is of paramount importance to validate the results from their use in biomedical research. Although isoenzyme polymorphism is the standard method, molecular methods based on mitochondrial DNA (mtDNA) have been developed to replace it. The aim of this study was the improvement of our isoenzyme electrophoretic analysis and the validation of one molecular technique targeted at mtDNA for the authentication of our animal cell lines. The combined method of cellular lysing through osmotic shock, followed by freezing-thawing in N 2 to obtain isoenzyme extracts, and with 42 × 10 6 cells maintained the best efficiency. The superior electrophoretic conditions were PAGE run at 200 V. All cell lines had isoenzymatic mobility corresponding to their species to lactate dehydrogenase, malatedehydrogenase, and glucose-6-phosphate dehydrogenase isoenzymes, and could be distinguished from each other. Two molecular techniques based on mtDNA were tested, one on the cytochrome b gene and other on cytochrome c oxidase I subunit gene. Due to difficulties in distinguishing all cell lines using only one these techniques, we merged the primers of two methods in such a way that there was a sufficient differentiation of all DNA fragments. The sequencing of these PCR products was also performed to validate these data.

Demography and esterase polymorphism of brazilian populations of Zaprionus indianus (Diptera: Drosophilidae) from the Brazilian Cerrado localities

“…One of the ways to expand the knowledge about these bioinvaders is to identify the genetic structure of different populations aiming to evaluate the degree of isolation and gene flow among them as an indication of their movement along the geographical landscape. One tool for this purpose is the evaluation of genetic polymorphisms from the isoenzyme variation in populations [36][37][38][39][40] .…”

“…These enzymes show different electrophoretic mobility patterns, which indicates polymorphisms that could differ between populations and species that inhabit different environments [36][37][38][39][40] . From enzymatic polymorphisms, it is possible to study genetic population structure, detect and calculate the endogamy coefficient and verify the gene flow, natural selection and genetic drift occurrence.…”

Sık Kullanılan Bazı Hücre Hatları için Kalite Kontrol: Mikoplazma Kontaminasyon Tespiti, Sitokrom B ve Sitokrom Oksidaz Alt Birim I Genlerinin DNA Dizi Analizlerinin Gerçekleştirilmesi

“…Tüm bu olumsuzlukların bu hücre hatları ile çalışma yapan araştırmacılar için önemli bir sorun teşkil edeceği aşikârdır. Bu nedenle, bu tür kontaminasyonları kontrol etmek gereklidir 1,2,[7][8][9] .…”

“…1966'da izoenzim polimorfizmi genetik bir belirteç olarak kullanılmış ve Glukoz-6-fosfat dehidrogenaz (G6PD) polimorfizmi HeLa hücre kontaminasyonu problemini netleştirmiştir. İzoenzim polimorfizminin biyokimyasal analizi, hücre çizgisi tanımlama ve kesişme noktalarının kontaminasyonunun kalite kontrolünde standart yöntem olarak kabul edilmektedir ve hücrelerarası çapraz kontaminasyon tespiti için DNA parmak izi ile birlikte rutin olarak dünyadaki ana biyolojik kaynak merkezleri American Type Culture Collection (ATCC), European Collection of Authenticated Cell Cultures (ECACC), German Collection of Microorganisms and Cell Cultures (DSMZ) ve Riken tarafından kullanılmaktadır 9 . Çok az sayıda laboratuvar, testlerin maliyeti ve karmaşıklığı nedeniyle düzenli olarak izoenzim analizleri veya parmak izi çalışmaları yapmaktadır.…”

“…Çok az sayıda laboratuvar, testlerin maliyeti ve karmaşıklığı nedeniyle düzenli olarak izoenzim analizleri veya parmak izi çalışmaları yapmaktadır. Buna ek olarak ve belki de en önemlisi, dergi editör kurulları, çalışma grupları ve araştırmaları destekleyen kuruluşlar, hücre hatlarının tür ve köken bilgilendirmesinin çalışma bilgisine dahil edilmesinde ısrar etmemektedir 9 .…”