Um método isocrático de cromatografia líquida de alta resolução de fase reversa (RP-HPLC) foi desenvolvido para determinação de gemifloxacin a granel, em formulações e soro humano a 270 nm. A separação cromatográfica foi adquirida em uma coluna Purospher STAR C 18 (250 × 4,6 mm, 5 µm) usando a fase móvel metanol:água (90:10, v/v) ajustada para pH 2,8 com ácido fosfórico 85% em fluxo de 1,5 mL min -1 a temperatura ambiente. As curvas de calibração mostraram-se lineares dentro do intervalo de 5-100 µg mL -1 com um coeficiente de correlação de 0,9998. Os limites de detecção (LOD) e de quantificação (LOQ) foram 0,015 and 0,045 µg mL -1 , respectivamente. Os resultados de precisão intra-e inter-corridas e de exatidão foram 98,73-100,12%, que foram correlacionados através do teste t student. Este método foi aplicado para interações in vitro do gemifloxacino com elementos essencial e traço.An isocratic reversed phase high-performance liquid chromatographic (RP-HPLC) method has been developed for the determination of gemifloxacin in bulk, dosage formulations and human serum at 270 nm. Chromatographic separation was achieved on Purospher STAR C 18 (250 × 4.6 mm, 5 µm) column using mobile phase methanol:water (90:10, v/v) adjusted pH 2.8 via phosphoric acid 85% having flow rate of 1.5 mL min -1 at ambient temperature. Calibration curves were linear over range of 5-100 µg mL -1 with a correlation coefficient 0.9998. The limit of detection (LOD) and limit of quantitation (LOQ) were 0.015 and 0.045 µg mL -1 , respectively. Intra and inter-run precision and accuracy results were 98.73-100.12% and then correlated through student's t-test. This method was further applied for in vitro interactions of gemifloxacin with essential and trace elements.