␣-Synuclein (␣-syn) is a small protein of unknown function that is found aggregated in Lewy bodies, the histopathological hallmark of sporadic Parkinson disease and other synucleinopathies. Mutations in the ␣-syn gene and a triplication of its gene locus have been identified in early onset familial Parkinson disease. ␣-Syn turnover can be mediated by the proteasome pathway. A survey of published data may lead to the suggestion that overexpression of ␣-syn wild type, and/or their variants (A53T and A30P), may produce a decrease in proteasome activity and function, contributing to ␣-syn aggregation. To investigate the relationship between synuclein expression and proteasome function we have studied proteasome peptidase activities and proteasome subunit expression (␣, ␤-constitutive, and inducible) in mice either lacking ␣-syn (knockout mice) or transgenic for human ␣-syn A30P (under control of PrP promoter, at a time when no clear gliosis can be observed). Similar studies are presented in PC12 cells overexpressing enhanced yellow fluorescent protein fusion constructs of human wild type, A30P, and A53T ␣-syn. In these cell lines we have also analyzed the assembly of 20 S proteasome complex and the degradation rate of a well known substrate of the proteasome pathway, I b␣. Overall the data obtained led us to the conclusion that ␣-synuclein expression levels by themselves have no significant effect on proteasome peptidase activity, subunit expression, and proteasome complex assembly and function. These results strengthen the suggestion that other mechanisms resulting in synuclein aggregation (not simply expression levels) may be the key to understand the possible effect of aggregated synuclein on proteasome function.

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Resumen: Objetivos. El presente trabajo tiene por objetivo obtener, mediante cultivo in vitro, láminas de tejido oral en las que se pueda identificar las estructuras de una mucosa oral completa. La aplicación clínica del presente estudio permitiría, en determinados casos, la sustitución del empleo de injertos libres de piel o autólogos de mucosa oral por esta técnica. Material y Méto-do. A partir de pequeñas biopsias de mucosa oral se hicieron cultivos primarios de queratinocitos. A partir de estos cultivos primarios se realizaron cultivos secundarios sobre una submucosa artificial constituida por colágeno y fibroblastos humanos. Se analizaron histológicamente sus características in vitro, y ulteriormente se procedió a la realización de injertos en ratones atímicos para conocer su comportamiento in vivo. Resultados. Los cultivos primarios fueron confluentes en un plazo mínimo de 10 días y máximo de 12 días, periodo similar al observado para la confluencia de los cultivos secundarios. El tiempo transcurrido desde la toma de la muestra hasta la obtención de una mucosa artificial completa osciló entre los 20 y los 22 días, mostrando las características histológicas de una mucosa normal. Tras 17 días de injerto en ratones inmunoincompetentes, sin ningún tipo de contingencia clínica, la caracterización histológica e inmunohistoquímica (citoqueratinas 13 y 19, coláge-no IV y laminina) confirmó la similitud de la mucosa in vitro con la mucosa oral sana. Conclusión. Es posible mediante técnicas de cultivo in vitro la obtención de un equivalente de mucosa oral completa con colágeno y fibroblastos. Si bien esta mucosa muestra un importante grado de retracción, su manejo clí-nico es muy favorable. IntroducciónEn 1975 Rheinwald y Green, describieron un método para cultivar láminas de tejido epitelial in vitro utilizando como células cebadoras una capa de fibroblastos de ratón (células 3T3) letalmente irradiados, en un medio que contenía suero fetal-bovino y factores de crecimiento celular. Consiguieron la primera línea de queratinocitos a partir de un teratoma de ratón. 1 Dos años más tarde publicaron la técnica para la obtención de queratinocitos humanos cultivados in vitro. 2 El epitelio humano autólogo obtenido mediante cultivo ha sido usado con éxito desde 1980 como cobertura permanente de grandes defectos cutáneos. [3][4][5][6] Es interesante remarcar que el epitelio trasplantado conserva las características del sitio donante. Actualmente esta técnica constituye una reconocida forma de tratamiento en grandes quemados. 5 En 1990 De Luca y cols. 4 utilizaron clínicamente mucosa oral obtenida mediante cultivo de queratinocitos procedentes del paladar, para el tratamiento de defectos gingivales de origen periodontal, demostrando la posibilidad de obtener grandes cantidades de epitelio cultivado capaces de mantener las propiedades de la zona donante, a partir de una biopsia de 1-3 mm 2 . Ragoebar y cols., 7 utilizaron la técnica de cultivo in vitro de mucosa oral para cubrir defectos causados durante la realización de vest...