Huanglongbing (HLB) disease is seriously threatening and/or damaging the citrus industry worldwide. Accurate detection of the three species associated with HLB disease, 'Candidatus Liberibacter asiaticus', 'Candidatus Liberibacter africanus' and 'Candidatus Liberibacter americanus', is essential for the preventive control of the disease. Real-time PCR is a useful tool for bacterial detection. However, nucleic acid purification steps limit the number of samples that can be processed by PCR. Universal detection of 'Ca. Liberibacter' species was achieved by direct tissue-printing and spotting of plant leaf petiole extracts or squashing of individual psyllids onto paper or nylon membranes. Primers were designed and used with TaqMan chemistry for accurate detection of the bacterium in immobilized targets (prints of 10 overlapping leaf pedicels per tree, or squashed single vectors), by extraction with water and direct use for real-time PCR. This simplified method was validated and could detect HLB-liberibacters in 100% of leaves with symptoms and 59% of symptomless leaves collected from HLB-infected trees. The use of direct assays as template showed good agreement with use of purified DNA (j = 0Á76 AE 0Á052). The squash assay allowed detection of the bacterium in 40% of mature Diaphorina citri that fed on leaves of HLB-infected trees with or without symptoms. A commercial ready-made kit based on this technology showed 96% accuracy in intra-laboratory performance studies. The simplified direct methods of sample preparation presented herein can be effectively adopted for use in rapid screening of HLB agents in extensive surveys, certification schemes or for epidemiological and research studies.

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-The objective of this work was to evaluate the reaction of four sweet orange cultivars expressing the attacin A gene to 'Candidatus Liberibacter asiaticus' (Las) infection, a bacterium associated to huanglongbing (HLB) disease. Transgenic sweet orange plants of Hamlin, Natal, Pêra, and Valência cultivars, as well as nontransgenic controls received inocula by grafting budwood sections of HLB-infected branches. Disease progression was evaluated through observations of leaf symptoms and by polymerase chain reaction (PCR) analysis, eight months after inoculation. A completely randomized design was used, with four experiments (one for each cultivar) performed simultaneously. Bacteria title was estimated by quantitative PCR (qPCR). HLB symptoms and Las titers were present in nontransgenic and transgenic plants expressing the attacin A gene of the four sweet orange cultivars, eight months after bacteria inoculation. Five transgenic lines (transformation events) of 'Pêra' sweet orange expressing the attacin A gene have significantly lower Las titers in comparison with nontransgenic plants of this cultivar.Index terms: Citrus sinensis, antibacterial peptide, disease resistance, genetic transformation, huanglongbing. Reação de cultivares de laranjeira doce que expressam o gene atacina A à infecção com 'Candidatus Liberibacter asiaticus'Resumo -O objetivo deste trabalho foi avaliar a reação de quatro cultivares de laranjeira doce que expressam o gene atacina A à infecção por 'Candidatus Liberibacter asiaticus' (Las), bactéria associada à doença huanglongbing (HLB). Plantas transgênicas das cultivares Hamlin, Natal, Pêra e Valência, bem como controles não transgênicos, receberam inóculos, por enxertia, de seções de ramos infectados por HLB. A progressão da doença foi avaliada pela observação de sintomas foliares e por análise da reação em cadeia da polimerase (PCR), oito meses após a inoculação. Utilizou-se o delineamento inteiramente casualizado, com quatro experimentos (um para cada cultivar) realizados simultaneamente. A concentração bacteriana foi estimada por PCR quantitativo (qPCR). Sintomas de HLB e Las estavam presentes em plantas não transgênicas e em plantas transgênicas que expressaram o gene atacina A, nas quatro cultivares de laranjeira doce, oito meses após a inoculação. Cinco linhagens transgênicas (eventos de transformação) de laranjeira 'Pêra', que expressam o gene atacina A, apresentam concentrações de Las significativamente inferiores às das plantas não transgênicas desta cultivar.Termos para indexação: Citrus sinensis, peptídeo antibacteriano, resistência a doenças, transformação genética, huanglongbing.

RESUMO Há pouca informação disponível sobre a relação entre folhas e raízes de teca, cultivada no Brasil. O objetivo deste trabalho foi avaliar se a biomassa dos componentes da parte aérea e a área foliar são bons estimadores da biomassa e da superfície de raízes, em povoamentos de teca (Tectona grandis). Na amostragem, realizada em árvores de teca, com 17 e 90 meses de idade, em parcelas estabelecidas em talhões comerciais em Tangará da Serra, MT, foram individualizados os componentes raízes, folhas, galhos e tronco, determinando-se, posteriormente, suas biomassas secas, AFE (área foliar específica) e ARE (área radicular específica). A superfície da folha de uma árvore jovem é quatro vezes maior que a superfície de uma folha de árvore adulta de teca. A superfície de raízes finas (< 2 mm) das árvores adultas é quatro vezes maior que a superfície de raízes médias (2 a 5 mm). A AFE foi de 13,14 m² kg-1 e a ARE de 13,86 m² kg-1, indicando eficiência semelhante quanto à utilização do C na produção de superfícies para aquisição de radiação solar, água e nutrientes e, ainda, que há sincronia na alocação de C entre folhas e raízes finas para formação de novos tecidos foliares e radiculares. O IAF (Índice de Área de Folha) médio foi 1,2 m2 m-2, nas árvores jovens, e de 8,3 m2 m-2, nas árvores adultas. As relações entre áreas foliares e biomassas das partes aéreas com as áreas superficiais e biomassas de raízes finas e médias refletem os padrões de alocação de carbono nas árvores, até a idade em que foram avaliadas. A área foliar é um bom estimador da área superficial de raízes de teca.