-The importance in folk medicine, combined to threats in their environment, becomes necessary to carry out studies involving large-scale propagation of Lippia genus. Although the tissue culture propagation is widely disseminated for medicinal plants, for L. rotundifolia any article was published yet. The present study aimed to establish an efficient protocol for micropropagation of L. rotundifolia. Nodal segments, taken from plants collected in the Espinhaço Range, were disinfected, and cultures were initiated on MS medium with PVPP (1 g L -1), sucrose (3%) and agar (0.7%). The culture were maintained in a growth room at controlled conditions. Disinfestation procedures and the supply of PVPP on culture media resulted in both reduced contamination and phenol oxidation rates, with more than 90% of viable cultures. In the multiplication phase were tried different BAP and NAA combinations supplied to the MS medium. The treatment that resulted in highest multiplication rates was 0.33 M BAP. The effects of NAA were evaluated for in vitro rooting. At 0.44 M, rooting was 70% higher than that observed in the control. The acclimatization was held in trays with substrate, coated with translucent plastic and kept under shade. The plantlets were transferred to the greenhouse after 15 days and transplanted to plant beds after 30 days. The acclimatized plantlets bloomed one year after the transference to field conditions, showing that the in vitro culture did not affect the vegetative and reproductive development, which confirms the potential of micropropagation to reduce the extinction risk of L. rotundifolia.Key words: Micropropagation. In vitro multiplication. In vitro rooting. Ex vitro acclimatization. Biodiversity conservation.RESUMO -A importância na medicina popular, assim como as ameaças em seu ambiente, tornam necessária a realização de estudos envolvendo a propagação em larga escala de plantas do gênero Lippia. Embora a propagação in vitro seja amplamente disseminada para plantas medicinais, nenhum artigo foi publicado ainda com L. rotundifolia. O presente estudo teve como objetivo estabelecer um protocolo eficiente para a micropropagação dessa espécie. Segmentos nodais, retirados de plantas coletadas na Cadeia do Espinhaço, foram desinfetados antes da inoculação em meio MS suplementado com PVPP (1 g L -1), sacarose (3%) e ágar (0,7%). Os tubos de ensaio foram mantidos em sala de crescimento sob condições controladas. O tratamento de desinfestação e a adição de PVPP aos meios de cultura resultaram na redução da infecção microbiológica assim como nas taxas de oxidação fenólica, proporcionando mais de 90% de culturas assépticas e viáveis . Na fase de multiplicação foram testadas diferentes combinações de BAP e ANA adicionadas ao meio MS. O tratamento que resultou em maiores taxas de multiplicação foi de 0,33 M de BAP. Os efeitos do ANA foram avaliados no enraizamento in vitro. A 0,44 M de ANA, o enraizamento foi 70% superior ao observado no controle. A aclimatização foi realizada em bandejas com substrato, rev...

Herbivory in plant reproductive tissues can severely reduce the fitness of the species, especially for those threatened with extinction. We investigated aspects of the reproductive ecology of Neoregelia ibitipocensis (Leme) Leme, an endangered species restricted to a few cloud forests sites in the Brazilian Atlantic Forest. Data on breeding systems, fertility, and viability of its populations are provided, as well as alternatives for development of strategies for ex situ conservation. Hand pollination experiments revealed that N. ibitipocensis is partially self-incompatible. Fruit and seeds were affected by intense herbivory caused by Tipulidae (Diptera) larvae. The predation reached 100% of the analysed infructescences during the first year of the study. We observed the production of parthenocarpic fruit both through controlled pollination experiments and under natural conditions. The potential for self-pollination and autogamy probably compensate for the reduced ability of the species to attract pollinators due to its small floral display. In the same way, parthenocarpy seems to represent a strategy to enhance the fitness of N. ibitipocensis, mitigating the effects of the predation. We developed an efficient protocol of in vitro multiplication, which represents a viable alternative for ex situ conservation of the species.

This work aimed to develop a protocol for the in vitro establishment, multiplication, rooting and ex vitro acclimatization of Mimosa pudica L., a species used in folk medicine and with pharmacological activity. Aseptic cultures were established from seeds inoculated in MS medium, without growth regulators, followed by an in vitro stabilization phase in culture medium supplemented with 2.22 μM BAP. The cultures were transferred to MS medium supplemented with different cytokinins, combined or not with an auxin, aiming its large-scale propagation. The culture medium supplemented with 5 µM BAP plus 0.5 µM NAA provided the highest multiplication rate and top quality plantlets. The combination of 0.6 µM TDZ plus 0.05 µM NAA resulted in higher multiplication rates than in response to combination of BAP plus NAA, although the subsequent maintenance of the cultures in a medium without growth regulators has resulted in low regenerative response. In vitro rooting of micro-cuttings was high even in the absence of auxins. Over 90% of plantlets transferred to the greenhouse survived after the acclimatization phase. Acclimatized plants presented normal vegetative and reproductive development. The procedures established in the present study allow a massive production of M. pudica plants for further pharmacological studies.

In this study, the activities of antioxidant enzymes, photosynthetic pigments, proline and carbohydrate contents in Pitcairnia encholirioides under ex vitro conditions of water deficit were evaluated. Results show that plants under progressive water stress, previously in vitro cultured in media supplemented with 30 g L-1 sucrose and GA3, accumulated more proline and increased peroxidase (POD) activity and the contents of photosynthetic pigments and carbohydrates. For plants previously in vitro cultured with 15 g L-1 sucrose and NAA, no differences were found for proline content and there were reductions in activities of peroxidase (POD), catalase (CAT) and poliphenoloxidase (PPO), and in contents of carbohydrates, with progress of ex vitro water deficit. After rehydration, plants showed physiological recovery, with enzymatic activities and contents of metabolites similar to those found in the controls not submitted to dehydration, regardless of the previous in vitro culture conditions. These results show that micropropagated P. encholirioides has high tolerance to dehydration once in ex vitro conditions, which can ensure the survival of plants from tissue culture when transferred to its natural environment, emphasizing the importance of such biotechnology for the propagation of endangered species.

Bromeliaceae é caracterizada como um grupo altamente diversificado de plantas monocotiledôneas com distribuição essencialmente neotropical. A Floresta Atlântica, considerada um dos hotspots mundiais de biodiversidade, representa um dos principais centros de diversidade da família, além de elevada riqueza de espécies e endemismo. No domínio Atlântico, muitas espécies de bromélias apresentam distribuição restrita e exibem alta especificidade de habitats, como é o caso das espécies foco do presente estudo. Neoregelia ibitipocensis (Leme) Leme é uma bromélia rara e endêmica, com populações restritas às florestas nebulares da Serra da Mantiqueira; Nidularium ferdinandocoburgii Wawra ocorre principalmente no interior de florestas entre 1.000 e 1.600 m de altitude, foi registrada na Serra do Ibitipoca, Serra de Araras e Serra Negra; Nidularium marigoi Leme ocorre principalmente entre 1.300 a 2.700 m de altitude, é típica da Serra da Mantiqueira nos estados do sudeste do Brasil, a espécie é classificada como “Quase Ameaçada” no Livro Vermelho da Flora Brasileira e Vriesea penduliflora L.B.Sm., é endêmica da Serra da Mantiqueira nos estados de Minas Gerais e Rio de Janeiro, avaliada como “Em Perigo” pelo Livro Vermelho da Flora Brasileira. Este estudo foi realizado no Parque Estadual do Ibitipoca (PEIB), o qual integra o Complexo da Serra da Mantiqueira, região considerada de extrema importância para a conservação da biodiversidade. Para caracterizar a biologia reprodutiva de N. ibitipocensis, N. ferdinandocoburgii, N. marigoi e V. penduliflora, e partindo do pressuposto de que a compreensão da biologia reprodutiva é essencial para preservar e conservar as espécies vegetais, esta tese é apresentada em dois capítulos. No primeiro capítulo são apresentados os resultados referentes à biologia reprodutiva de populações simpátricas de N. ferdinandocoburgii e N. marigoi. São fornecidos dados sobre a fenologia da floração e frutificação, biologia floral, ecologia da polinização, sistemas de reprodução, hibridização natural e sucesso reprodutivo dessas espécies. Nidularium ferdinandocoburgii e N. marigoi apresentam flores inodoras, com corolas tubulares e duração de dois dias. O pico de floração de N. ferdinandocoburgii ocorreu em dezembro, o néctar apresentou em média 11,52 mg de açúcares e Colibri serrirostris (Vieillot, 1816) foi observado como polinizador da espécie. A frutificação natural foi de 86,3%; a espécie é autoincompatível e apresenta breve hercogamia. Apenas uma população de N. marigoi, composta por oito indivíduos, foi localizada na área de estudo, destes apenas um floresceu. O néctar apresentou em média 6,97 mg de açúcares, a espécie é autoincompatível e apresenta hercogamia pronunciada. Os cruzamentos heteroespecíficos resultaram na produção de frutos férteis somente quando N. marigoi atuou como receptora de pólen, originando plantas vigorosas. O segundo capítulo teve como 10 objetivo caracterizar o sistema reprodutivo, a fenologia e a ecologia da polinização de V. penduliflora, uma espécie ameaçada de extinção. Para tanto, foi avaliada a fertilidade e a viabilidade de seus indivíduos por meio dos seguintes parâmetros: produção de flores, frutos e formação de sementes. Vriesea penduliflora floresce na estação chuvosa, com pico de floração em janeiro; suas flores apresentam antese diurna e permanecem abertas por cerca de 11 horas. O néctar foi produzido continuamente ao longo da antese e apresentou, em média, 27,79 mg de açúcares. O beija-flor C. serrirostris foi considerado seu principal polinizador, mas Apis mellifera (Linnaeus, 1758) também foi observada polinizando suas flores. Vriesea penduliflora é autocompatível, entretanto, não produz frutos sob autopolinização espontânea, sendo, portanto, dependente do serviço do polinizador. A florivoria causada por formigas do gênero Camponotus pode estar associada ao baixo sucesso reprodutivo apresentado pela espécie em condições naturais. Esta tese também resultou em um artigo já publicado, que teve como objetivo avaliar aspectos do sucesso reprodutivo de N. ibitipocensis e investigar a magnitude dos danos causados pela intensa herbivoria de frutos e sementes causada por larvas de Tipulidae (Diptera) em seu habitat natural. A herbivoria afetou 100% das infrutescências analisadas no primeiro ano do estudo. O sistema reprodutivo da espécie foi caracterizado, bem como a fertilidade e a viabilidade de suas populações naturais. Neoregelia ibitipocensis é parcialmente autoincompatível, com potencial para autofecundação e cruzamentos. Foi observada a produção de frutos partenocárpicos nos experimentos de polinização controlada e sob condições naturais. A partenocarpia parece representar uma estratégia para aumentar o sucesso reprodutivo de N. ibitipocensis, mitigando os efeitos causados pela predação em seu habitat natural. Além disso, desenvolvemos um protocolo eficiente para introdução e multiplicação in vitro de N. ibitipocensis, cujos resultados fornecem recomendações para o desenvolvimento de estratégias para a conservação in situ e ex situ desta espécie. Os resultados gerados nesta tese ampliam o conhecimento sobre os mecanismos reprodutivos em Bromeliaceae e contribuem para o desenvolvimento de estratégias de conservação para populações de espécies endêmicas e ameaçadas da Floresta Atlântica